| 产品简介

1．培养细胞
      取出裂解液，待融化后颠倒混匀数次，适量分装冻存。在使用前取出PMSF(100mM)，按比例加入（使其*终浓度为1mM）混匀，立即使用。

 贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍(如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞数秒后细胞就会被裂解。

悬浮细胞：收集培养细胞，离心去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍(如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)，用手指把细胞用力弹散，按6孔板每孔细胞加入100-200微升的比例加入裂解液。如果细胞数量较大，应按50-100万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加裂解液。用手指轻弹管底以促进裂解液和细胞充分接触，裂解完全时应无明显的细胞颗粒。

裂解物经10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。

 2．组织样品 
      取Ep管，分别称重标记，把组织剪切成小块装入Ep管中，称重。按每20毫克组织加100-200微升的比例加入裂解液(如裂解不完全，可以适当增加用量；如需要的蛋白样品浓度较高，可以适当减少用量)。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约1分钟或直至充分裂解。10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

    如果组织样品本身非常细小，如淋巴细胞，可直接加入裂解液，通过振荡（Vortex）以使样品裂解完全。

保存条件：
     PMSF需－20℃保存，裂解液若经常使用，可于4℃保存至少三个月。若长期保存，建议置于－20℃。

注意事项 ：
 1．为获得*佳的实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复冻融。 
 2．PMSF应现用现加。 
 3．裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 
 4．蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦直接接触，请立即用流水冲洗，再向医疗保健结构咨询。

包装清单： 
              

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更新时间：2024/9/23 10:42:56