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人表皮生长因子(EGF)elisa试剂盒操作步骤

点击次数:3568 发布时间:2015/3/30 11:02:06

人表皮生长因子(EGF)elisa试剂盒操作步骤

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

480pg/ml  5 号标准品  150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液

240pg/ml  4 号标准品  150µl 的 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

120pg/ml  3 号标准品  150µl 的 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

60pg/ml  2 号标准品  150µl 的 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

30pg/ml  1 号标准品  150µl 的 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.  温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.  配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

重复 次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

7.  温育:操作同 3

8.  洗涤:操作同 5

9.  显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。

11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

原创作者:上海心语生物科技有限公司

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