小鼠甲状腺素（T4）elisa试剂盒操作步骤

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

240μg/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

120μg/L 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

60μg/L 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

30μg/L 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

15μg/L 1 号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

原创作者：上海心语生物科技有限公司