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上海心语生物科技有限公司 主营产品:科研elisa试剂盒,酶联免疫试剂盒,elisa试剂盒厂家,elisa试剂盒免费代测,抗体检测elisa试剂盒,免疫因子elisa试剂盒

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资料下载

鱼纤维蛋白原(FIB)检测试剂盒说明书

点击次数: 688发布时间:2011/3/7

  • 上 传 者: 上海心语生物科技有限公司
  • 上传时间: 2015/3/25 13:34:02
  • 文件大小: 9KB
  • 文件类型: jpg
  • 所属分类: 操作维修手册
  • 下载次数: 479次
  • 查看次数: 688

资料简介: 鱼纤维蛋白原(FIB)检测试剂盒使用目的:

本试剂盒用于测定鱼血清、血浆及相关液体样本中纤维蛋白原(FIB)含量。

实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼纤维蛋白原(FIB)水平。用纯化的鱼纤维蛋白原(FIB)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入纤维蛋白原(FIB) ,再与 HRP 标记的纤维蛋白原(FIB)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。 颜色的深浅和样品中的纤维蛋白原 (FIB) 呈正相关。 用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中鱼纤维蛋白原(FIB)浓度。

鱼纤维蛋白原(FIB)检测试剂盒组成:

1  30 倍浓缩洗涤液  20ml×瓶  7  终止液  6ml×

2  酶标试剂  6ml×瓶  8  标准品(400ng/ml)  0.5ml×

3  酶标包被板  12 孔×条  9  标准品稀释液  1.5ml×

4  样品稀释液  6ml×瓶  10  说明书  

5  显色剂 液  6ml×瓶  11  封板膜  

6  显色剂 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  

标本要求:

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

鱼纤维蛋白原(FIB)检测试剂盒操作步骤:

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

200ng/ml  5 号标准品  150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液

100ng/ml  4 号标准品  150µl 的 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

50ng/ml  3 号标准品  150µl 的 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

25ng/ml  2 号标准品  150µl 的 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

12.5ng/ml  1 号标准品  150µl 的 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样 50µl, 待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl(样品*终稀释度为 倍) 。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.  温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.  配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

重复 次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

7.  温育:操作同 3

8.  洗涤:操作同 5

9.  显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10 分钟.

10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。

11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

鱼纤维蛋白原(FIB)检测试剂盒计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式, 将样品的 OD 值代入方程式, 计算出样品浓度, 再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项:

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间

控制在 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 

大于标准品孔孔的 OD 值) ,请先用样品稀释液稀释一定倍数(倍)后再测定,计

算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5) 。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

鱼纤维蛋白原(FIB)检测试剂盒保存条件及有效期:

1.试剂盒保存:2-8℃。

2.有效期:个月

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