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猪亚洲I型口蹄疫(FMD-I)ELISA试剂盒使用说明书
点击次数: 826发布时间:2011/3/7
资料简介: 猪亚洲I型口蹄疫(FMD-I)ELISA试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 实验原理 猪亚洲I型口蹄疫(FMD-I)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪亚洲I型口蹄疫(FMD-I)表达。用纯化的猪亚洲I型口蹄疫(FMD-I)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中亚洲I型口蹄疫(FMD-I)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的亚洲I型口蹄疫(FMD-I)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中猪亚洲I型口蹄疫(FMD-I)的存在与否。 猪亚洲I型口蹄疫(FMD-I)ELISA试剂盒组成 130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶 2酶标试剂6ml×1瓶8阳性对照0.5ml×1瓶 3酶标包被板12孔×8条9阴性对照0.5ml×1瓶 4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份 5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张 6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 猪亚洲I型口蹄疫(FMD-I)ELISA试剂盒操作步骤 1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50µl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀, 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。 8.洗涤:操作同5。 9.显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟. 10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。 试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10 临界值(CUTOFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定:样品OD值<临界值(CUTOFF)者为猪亚洲I型口蹄疫(FMD-I)阴性 阳性判定:样品OD值≥临界值(CUTOFF)者为猪亚洲I型口蹄疫(FMD-I)阳性 。 猪亚洲I型口蹄疫(FMD-I)ELISA试剂盒注意事项 1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。 2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 5.底物请避光保存。 6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm 7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须 注意安全。 猪亚洲I型口蹄疫(FMD-I)ELISA试剂盒保存条件及有效期 1.试剂盒保存:2-8℃。 2.有效期:6个月
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