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检测植物吲哚乙酸（IAA）Elisa试剂盒
点击次数：340 发布时间：2015/10/1 14:32:03
本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其 它相关样本中吲哚乙酸（IAA）含量。
实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物吲哚乙酸（IAA）水平。用纯化的植物吲哚
乙酸（IAA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物吲哚乙酸 （IAA），再与 HRP 标记的植物吲哚乙酸（IAA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合 物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作 用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物吲哚乙酸（IAA）呈正相关。用酶标仪 在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中植物吲哚乙酸（IAA）浓 度。
试剂盒组成：
| 试剂盒组成 | 48 孔配置 | 96 孔配置 | 保存 |
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| 说明书 | 1 份 | 1 份 | |
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| 封板膜 | 2 片（48） | 2 片（96） | |
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| 密封袋 | 1 个 | 1 个 | |
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| 酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
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| 标准品：36pmol/L | 0.5ml×1 瓶 | 0.5ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
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| 标准品稀释液 | 1.5ml×1 瓶 | 1.5ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
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| 酶标试剂 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
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| 样品稀释液 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
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| 显色剂 A 液 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
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| 显色剂 B 液 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
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| 终止液 | 3ml×1 瓶 | 6ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
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| 浓缩洗涤液 | （20ml×20 倍）×1 瓶 | （20ml×30 倍）×1 瓶 | 2-8℃保存 |
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标本要求： 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在、第二孔中分别加标 准品 100μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从孔、第二 孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl， 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl，
浓度分别为 24pmol/L，16pmol/L，8pmol/L，4pmol/L，2pmol/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样 品*终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混 匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30（48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30（48T 的 20 倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。 注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值 大于标准品孔孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标， 在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释 倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值 代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释 倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.92 以上。
2.批内与批见应分别小于 9%和 15%
检测范围：
0.8pmol/L –30pmol/L
保存条件及有效期： 1．试剂盒保存：2-8℃。 2．有效期：6 个月
原创作者：北京绿源大德生物科技有限公司
