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人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）ELISA试剂盒使用方法
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上传时间：2015/7/8 9:01:03
文件类型：jpg
上 传 者：江苏晶美生物科技有限公司
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本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
0.3U/L - 16U/L
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）水平。用纯化的人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入AMPK，再与HRP标记的AMPK抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的AMPK呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）浓度。
试剂盒组成
| 1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 8 | 标准品（32U/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 |
| 4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 |
| 5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 |
| 6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
| 16U/L | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 8U/L | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 4U/L | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 2U/L | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 1U/L | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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