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使用说明书
产品货号：E-EL-R0510c
（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）
声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品适用于体外定量检测大鼠血清、血
浆或其它相关生物液体中天然和重组 HABP1 浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！
如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。
试剂盒组成：
中文名称 英文名称 规格 保存条件
ELISA 酶标板（可拆卸） Micro ELISA Plate(Dismountable) 8×12 / 8×6 * 4℃/-20℃ #
冻干标准品 Reference Standard 2/1 支* 4℃/-20℃ #
标准品&样品稀释液 Reference Standard & Sample Diluent 1 瓶 20mL/12mL * 4℃
浓缩生物素化抗体 Concentrated Biotinylated Detection Ab 1 支 120μL/70μL * 4℃/-20℃ #
生物素化抗体稀释液 Biotinylated Detection Ab Diluent 1 瓶 10mL/6mL * 4℃
浓缩 HRP 酶结合物 Concentrated HRP Conjugate 1 支 120μL/70μL * 4℃(避光)
酶结合物稀释液 HRP Conjugate Diluent 1 瓶 10mL/6mL * 4℃
浓缩洗涤液（25×） Concentrated Wash Buffer (25×) 1 瓶 30mL/16mL * 4℃
底物溶液（TMB） Substrate Reagent 1 瓶 10mL/6mL * 4℃(避光)
反应终止液 Stop Solution 1 瓶 10mL/6mL * 4℃
封板覆膜 Plate Sealer 5/3 张*
产品说明书 Product Description 1 份
质检报告 Certificate of Analysis 1 份
特别说明：
*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）
#: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃.
相关试剂在分装检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗大鼠HABP1抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品
中的大鼠HABP1会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠HABP1抗
体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗大鼠HABP1抗体与结合在包被抗体上的大鼠HABP1结合、
生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB
在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，
HABP1浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中HABP1的浓度时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接样品收集:
1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集
血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可
检测。避免使用溶血，高血脂样品。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会
影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体
积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组
织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。*后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，
取上清检测。
4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
具体处理方法可参考：http://www.elabscience.cn/index.php/resources/view/aid/17671.jsp
6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻
存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。
8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先
做预实验，以确定稀释倍数）。
试验所需自备物品:
1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
4. 吸水纸
检测前准备工作:
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结
晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超
过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。
3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，
静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为20ng/mL）。
然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓
度：20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔
0ng/mL。如配制10ng/mL标准品：取0.5mL20ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样
品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。 倒
