ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎(DVH)抗体的ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)为例,间接ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)的操作程序如下。(1) 材料① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液;② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清;待检鸭血清; ③ ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。(2) 方法步骤① 加抗原包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干② 加待检血清 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 30分钟,加终止液⑤ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值,并计算出P/N比值。(3) 结果判定 已知阳性血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1,而且已知阳性血清的OD值≥0.4;在上述条件成立的情况下,如果待检血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1,而且待检血清的OD值≥0.4,则判为阳性,否则判为阴性。2.双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的双夹心抗体ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)为例介绍本法的操作程序。① 加抗体包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 15分钟,加终止液⑤ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。