用于检测未知抗体的间接法：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。↓ 加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照） ↓ 于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,*后一遍用DDW洗涤。↓ 其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。编辑本段（三）试剂器材1.　试剂 （1）包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）: NaHCO3 1.59克 NaHCO3　2.93克 加蒸馏水至1000ml（2）洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O　2.9克 NaCl　8.0克 KCl　0.2克 Tween-20　0.05%　0.5ml 加蒸馏水至1000ml （3）稀释液：牛血清白蛋白（BSA）0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。（4）终止液（2M　H2SO4）：蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98%）21.7ml。（5）底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）: 0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml 0.1M柠檬酸（19.2克/L）24.3ml 加蒸馏水50ml。（6）TMB（四甲基联苯胺）使用液: TMB（10mg/5ml无水乙醇）0.5ml 底物缓冲液（PH5.5）10ml 0.75%H2O2　32μl（7）ABTS使用液: ABTS　0.5mg 底物缓冲液（PH5.5）1ml 3%H2O2　2μl （8）抗原、抗体和酶标记抗体。（9）正常人血清和阳性对照血清。2.器材:（1）聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。（2）小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。（3）4℃冰箱，37℃孵育箱。