产品名称：  小鼠磷脂肌醇3激酶（PI3K）elisa试剂盒@免费代测

样本：      适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 

代测服务：  免费代测

应用：      酶联免疫分析

检测方法：  双抗夹心法

检测限：    见说明书

供应商：    上海润裕生物

数量：      现货

规格：      96T/48T

可检测动物类型丰富：人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、鸡、鱼等 

可检测指标齐全：白介素，干扰素，血管紧张素，肺炎衣原体，趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、炎症因子、血管生成素等等指标

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【实验准备】：

1. 小鼠磷脂肌醇3激酶（PI3K）elisa试剂盒@免费代测及待测样本

2. 酶标仪(450nm波长滤光片) 

3. 高精度移液器，EP管及一次性吸头

4. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 

5. 吸水纸

【标本要求】：

1、血清： 

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 

2、血浆： 

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。 

3、尿液： 

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。 

4、细胞培养上清： 

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。 

5、培养细胞: 

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 

6、组织标本: 

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 

7、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 

8、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 

【操作步骤】：

1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，依次进行稀释数倍。

2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4、配液：将30倍（48T 的20 倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

7、温育：操作同3。

8、洗涤：操作同5。

10、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

11、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

12、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

【操作事项】：

1、小鼠磷脂肌醇3激酶（PI3K）elisa试剂盒@免费代测准备：所有试剂都必须在使用达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

2、加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，第1个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间（包括标准品及所有样品）好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。

3、孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

4、洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。

5、试剂配制：Detection A及Detection B在使用请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置（如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl），以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

6、反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，每隔10分钟），如颜色较深，请提加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

7、底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

【特别说明】：

*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） 

#: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃，有效期6个月.

【上海润裕生物小鼠磷脂肌醇3激酶（PI3K）elisa试剂盒@免费代测免费代测服务说明】： 

1.每个指标需提供100微升样品，如做复孔则200微升 

2.标本离心处理后可通知我们工作人员上门取样（仅限本市），外省可通过泡沫箱加干冰或者冰袋寄送我司。