1．酶切前确定待切样品的浓度，并选择合适的限制性内切酶和配套Buffer（可选用二者活性都较高的Buffer 或者通用Buffer）。

2．按下列反应体系混匀样品，并短暂离心使样品沉于管底（该体系可根据载体或PCR产物的浓度进行调整，但必须确保酶量小于或等于总体积的1/10）。

载体双酶切：

              酶1          2.5μl

              酶2          2.5μl

              Buffer(10x)    10μl

载体          6μl   

H2O          79μl

PCR产物双酶切：

              酶1          2.5μl

              酶2          2.5μl

              Buffer(10x)    10μl

PCR产物      12μl   

H2O          73μl

各分装成50μl一管进行酶切。

3．将离心管置于37℃中温育4h左右（该条件可根据酶的活性温度及时间进行调整）。

4．用未酶切的质粒作为对照，琼脂糖电泳鉴定质粒酶切结果。

原创作者：武汉博欧特生物科技有限公司