企业档案
- 会员类型：免费会员
- 工商认证： 【未认证】
- 最后认证时间：
- 法人：
- 注册号：****
- 企业类型：生产商
- 注册资金：人民币万
联系我们
联系人：方小姐
技术文章
PCR回收及连接
点击次数：488 发布时间：2015/11/10 10:04:18
按照“PCR产物回收”中的步骤回收酶切后的PCR产物以及酶切、去磷酸化的载体，琼脂糖电泳检测，根据其亮度及片段大小估算摩尔浓度。
1．连接前先电泳确定待连接载体与片段的浓度，载体与片段的摩尔比为1∶3-5。
2．在离心管中加入如下成分：
10×连接Buffer 1μl
待连接的样品PCR产物+载体 8.5μl
NEB T4连接酶 0.5μl
如果连接粘性末端，16度连接2h至过夜，如果连接平性末端，16度连接6h以上（具体连接时间可根据具体实验进行调整）。
3．可以同时设立不加插入片段的对照，以测定假阳性背景（选做）。
4．转化之前无须将连接酶灭活，可取5μl连接产物直接转化，余下的-20度保存。
原创作者：武汉博欧特生物科技有限公司
