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ELISA背景深及全部呈有色原因是什么?

点击次数:18928 发布时间:2016/5/17 8:21:45
  五月初,清华大学的杨老师在我司购买了3个elisa试剂盒,前段时间,杨老师反馈ELISA背景深,全部呈有色,问是什么原因?希望能得到技术老师的解答。我司陈技术有着6年的ELISA酶联免疫法的操作经验,有着丰富的实验经历,为杨老师解答了心中的疑问,深受杨老师的赞扬!就杨老师的问题,我司陈技术做了以下分析:

ELISA实验中,背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)

根据陈技术的分析,可能存在的原因有以下几条:

 

1、ELISA实验可能原因:实验过程中洗涤不充分,洗后未拍干,样品中其它成分残留或酶标记物残留;

  解决办法:洗液准确配制;充分洗涤,静置15秒,彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染。

2、ELISA实验可能原因之二:底物污染,未避光保存,出现颜色;

解决办法:弃去底物,重新配置

3、ELISA实验可能原因之三:样品稀释液污染;

  解决办法:弃去稀释液,重新配置

4、ELISA实验可能原因之四:吸头重复使用,未洗净或消毒不彻底;

  解决办法:吸头尽可能一次性使用

5、ELISA实验可能原因之五:不正确的孵育时间,温度(尤其是底物孵育的时间);

  解决办法:*为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。完全按照说明书要求

6、ELISA实验可能原因之六:偶联抗体(streptavidin-HRP)浓度过高;

  解决办法:按照说明书调整到*佳的浓度

7、ELISA实验可能原因之七:板子不正确的贮存;

  解决办法:酶标板贮存于2-8 ℃;使用结合力低点的Elisa板

8、ELISA实验可能原因之八:没有正确封闭;

  解决办法:在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间

9、ELISA实验可能原因之九:样本溶血严重;

  解决办法:建议使用非溶血或轻微溶血样本,严重溶血样本会导致背景偏高。

一般上海情况下,ELISA实验中,背景深,全部呈有色的原因都一一列出来了!陈技术的表现让杨老师很满意!这次试验完成后,准备下次再订购2盒。

上海极威生物科技有限公司是一家专业生产各类ELISA试剂盒,标准品,细胞及相关生物试剂的生物公司,公司产品丰富,种类齐全,价格实惠,售后完善!欢迎广大科研学者前来选购!

 

原创作者:界首市泉翔绳业有限公司

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