本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断
烟草花叶病毒(TMV)ELISA 检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被烟草花叶病毒(TMV)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的烟草花叶病毒(TMV)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),判断样品是否含有烟草花叶病毒(TMV)。
烟草花叶病毒(TMV)ELISA 检测试剂盒-价格/说明书-GIVEI生物
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪(450nm)
2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
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操作注意事项
1. 试剂盒保存在 2-8℃,使用室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 预处理后的样本无需稀释,直接取 10μL 加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用充分摇匀。
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按 1:20 稀释,即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
洗板方法
1.手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置 1min 后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板 5 次。
2.自动洗板机:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。
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操作步骤
1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2. 设置阴、阳性对照孔和样本孔,阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各 50μL;
3. 待测样本孔先加待测样本 10μL,再加样本稀释液 40μL;
4. 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗原100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5 次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入终止液 50μL,15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的OD 值。
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结果判断
1.试验有效性:阳性对照孔 OD 值平均值≥1.00;阴性对照孔 OD 值平均值≤0.15。
2.临界值(Cut off)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3.阴性判断:样品 OD 值<临界值(Cut off),样品为阴性
4.阳性判断:样品 OD 值>临界值(Cut off),样品为阳性
原创作者:上海极威生物科技有限公司