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细胞色素 P450 酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）-价格/说明书-极威生物
点击次数：17190 发布时间：2021/1/14 21:28:42
细胞色素 P450 酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
细胞色素 P450 酶系（CYP-ECOD）总活性荧光定量检测试剂是种旨在通过乙氧基香豆素脱乙基酶反应系统中乙氧基香豆素转化为羟基香豆素后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中酶系活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织裂解萃取液样品（动物、人体）或纯化微粒体样品细胞色素 P450 酶系的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
细胞色素 P450 酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）-价格/说明书-GIVEI生物
技术背景
技术背景
细胞色素P450酶是肝细胞微粒体复合功能单加氧化酶系统的总称。其分成五十多个亚酶：CYP1至CYP51。作用在于体内外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation）。乙氧基香豆素脱乙基酶（7-ethoxycoumarin O-deethylase；ECOD）的活性是细胞色素P450酶系的诊断标记，其基于ECOD广泛性催化细胞色素P450亚酶的活性。乙氧基香豆素（7-ethoxycoumarin）在乙氧基香豆素脱乙基酶的催化下，转化为羟基香豆素（7-hydroxycoumarin）后荧光峰值的变化（激发波长368nm，散发波长456nm），来定量测定细胞色素P450酶系的活性。乙氧基香豆素脱乙基酶反应系统为：
细胞色素 P450 酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）-价格/说明书-GIVEI生物
产品内容
细胞色素 P450 酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）-价格/说明书-GIVEI生物
产品内容
缓冲液（Reagent A） 毫升
反应液（Reagent B） 微升
底物液（Reagent C） 微升
终止液（Reagent D） 毫升
标准液（Reagent E） 微升
产品说明书 1 份
细胞色素 P450 酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）-价格/说明书-GIVEI生物
保存方式
保存方式
保存在－20℃冰箱里，反应液（Reagent B）、底物液（Reagent C）和标准液（Reagent E）避免光照，终止液（Reagent D）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证 6 月
用户自备
1.5 毫升离心管：用于标准样品配制和反应的容器培养箱：用于孵育反应200 微升 1 厘米光径比色皿或黑色 96 孔板：用于荧光分析的容器荧光分光光度仪过荧光酶标仪：用于荧光分析2
实验步骤
实验开始，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作。
、 测定准备
1． 准备好待测样品（例如细胞裂解萃取液或微粒体样品等），置于冰槽里
2． 设定好荧光分光光度仪（温度为 37℃）：激发波长 370nm，散发波长 450nm，并置零
3． 准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管
4． 分别加入 xx 微升缓冲液（Reagent A）到每个离心管
5． 移取 xx 微升标准液（Reagent E）到 1 号管，混匀
6． 小心移取 xx 微升 1 号管稀释的标准液（Reagent E）到 2 号管，混匀
7． 小心移取 xx 微升 2 号管稀释的标准液（Reagent E）到 3 号管，混匀
8． 小心移取 xx 微升 3 号管稀释的标准液（Reagent E）到 4 号管，混匀
9． 将 1 至 5 号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
管号 缓冲液（Reagent A） 标准液（Reagent E） 测定体系 标准羟基香豆素浓度
1 xx 微升 xx 微升 xx 微摩尔/升
2 xx 微升 xx 微升 1 号管 xx 微摩尔/升
3 xx 微升 xx 微升 2 号管 xx 微摩尔/升
4 xx 微升 xx 微升 3 号管 xx 微摩尔/升
5 xx 微升 空对照 0
二、 标准曲线测定
1． 移取 xx 微升缓冲液（Reagent A）到 1.5 毫升离心管
2． 加入 xx 微升反应液（Reagent B）
3． 加入 xx 微升底物液（Reagent C）
4． 加入 20 微升上述配制的标准样品
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在 37℃温度下孵育 15 分钟，避免光照
7． 加入 xx 微升终止液（Reagent D），混匀
8． 在 37℃温度下孵育 5 分钟，避免光照
9． 转移到新的比色皿或黑色 96 孔板
10．即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
11．实际荧光单位：标准样相对荧光读数－5 号管标准样荧光读数（作为空对照）
12．构建标准曲线：纵座标（Y 轴）为实际相对荧光单位（RFU）；横座标（X 轴）为标准羟基香豆素浓度（微摩尔/升）
三、 样品测定1． 移取 xx 微升缓冲液（Reagent A）到 1.5 毫升离心管
2． 加入 xx 微升反应液（Reagent B）
3． 加入 5 微升底物液（Reagent C）
4． 加入 xx 微升待测样品（20 微克微粒体蛋白或 100 微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在 37℃温度下孵育 15 分钟，避免光照
7． 加入 xx 微升终止液（Reagent D），混匀
8． 在 37℃温度下孵育 5 分钟，避免光照
9． 转移到新的比色皿或黑色 96 孔板
10．即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
11．实际荧光单位：样品相对荧光读数－5 号管标准样荧光读数（作为空对照）
12．根据标准曲线获得样品对应羟基香豆素浓度（微摩尔/升）
四、 计算样品实际活性
注意事项
1． 本产品为 25 次操作，包括标准测定
2． 操作时，须戴手套
3． 系统操作过程中，标准液测定只需 1 次
4． 终止液（Reagent D）具有腐蚀性，注意操作安全
5． 样品须澄清，至关重要（本公司提供细胞可溶性总蛋白质制备试剂盒 GMS30002.1）
6． 如果酶活性过低，可以增加孵育时间至 45 分钟（37℃温度下）
7． 荧光测定后，比色皿须清洗彻底
8． 建议待测样本为微粒体，其蛋白浓度为 20 微克/100 微升；待测样本为细胞悬液，其蛋白浓度为 100至 200 微克/100 微升（本公司提供 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒 GMS30030.1）
9． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
10．如果检测血液样品，建议使用体外非细胞系统细胞色素 P450 酶系总活性荧光定量检测试剂盒
11．细胞色素 P450 酶系单位活性定义为：在 37℃，pH 7.5 条件下，每分钟内能够转化 1 纳摩尔乙氧基香豆素至羟基香豆素所需的酶量作为个活性单位
12．本公司提供系列毒理学检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组份订购信息
编号 名称 规格
GMS18016.1 细胞色素 P450 酶系总活性荧光定量检测试剂盒 25 次
GMS18016.1A 缓冲液（Reagent A） 毫升
GMS18016.1B 反应液（Reagent B） 毫升
GMS18016.1C 底物液（Reagent C） 微升
GMS18016.1D 终止液（Reagent D） 毫升
GMS18016.1E 标准液（Reagent E） 微升
试剂盒订购信息
产品编号 名称 规格
GMS18001 细胞/组织 S9 组分分离试剂盒 50 次
GMS18002 细胞/组织微粒体组分分离试剂盒 50 次
GMS18003 细胞色素 P450 酶体系浓度定量检测试剂盒 20 次
GMS18016.1 细胞色素 P450 酶（CYP－ECOD）总活性荧光定量检测试剂盒 20 次
GMS18016.2 体外非细胞系统细胞色素 P450 亚酶（CYP－ECOD）总活性荧光定量检测试剂盒 20 次
原创作者：界首市泉翔绳业有限公司
