通用型细胞核形态染色/细胞凋亡检测试剂盒

主要用途

通用型细胞核形态染色/细胞凋亡检测试剂是一种旨在通过荧光染料与DNA特异性结合，呈现蓝色，用于分析和观察细胞核形态或DNA含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞核（动物、人体、植物、昆虫等）的观察。可以被用于细胞周期、细胞凋亡、细胞流式仪分析等研究。产品严格无菌，即到即用，荧光清晰，操作简捷，性能稳定。

技术背景

赫斯特染料（Hoechst 33258）为特异性 DNA 活性染料，与 A-T 键结合，这种染料对死细胞或固着细胞可立即染色。而活细胞的着色是渐进性的，在 10 分钟内可达饱和。在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。在紫外光激发下，呈现明亮的蓝色荧光。

产品内容

清理液（Reagent A）         毫升

反应液（Reagent B）          毫升

染色液（Reagent C）          微升

产品说明书                           1份

保存方式

保存染色液（Reagent C）在－20℃冰箱里，用铝箔封裹，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效bao证6月

用户自备

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离

wan全细胞培养液（G&VS12052）：用于中和胰蛋白酶的处理

15毫升锥形离心管：用于细胞收集的容器

1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器

微型台式离心机：用于细胞收集的操作

倒置荧光显微镜：用于观察细胞核形态

细胞流式仪：用于细胞荧光分析

实验步骤

实验开始前，从－20℃冰箱里取出染色液（Reagent C），置入冰槽里融化。移出xx微升反应液（Reagent B）和xx微升染色液（Reagent C）到新的1.5毫升离心管，混匀后标记为染色工作液。然后进行下列操作。

一、 直接法

1． 准备1个细胞培养12孔板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约30万细胞数）

2． 小心抽去细胞培养液

3． 轻轻沿着孔壁加入xx毫升 清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面

4． 小心抽去xx毫升 清理液（Reagent A）

5． 加入xx微升含有反应液（Reagent B）和染色液（Reagent C）的染色工作液， 覆盖培养孔表面

6． 在暗室里室温下孵育2分钟

7． 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：紫外波长350nm（细胞核呈现蓝色）

二、间接法

1． 准备1个细胞培养12孔板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约30万细胞数）

2． 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集悬浮细胞）

3． 加入xx毫升 清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面

4． 小心移出xx毫升 清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管（收集洗脱细胞）

5． 加入500微升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养孔表面

6． 放进37℃培养箱孵育1分种

7． 轻轻手击震动培养板，使细胞脱落

8． 加入1毫升用户自备的wan全细胞培养液

9． 移入15毫升锥形离心管

10． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g

11． 小心抽去上清液

12． 加入xx微升清理液（Reagent A）

13． 用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群

14． 转入到1.5毫升离心管或细胞流式仪专用测试管

15． 加入xx微升含有反应液（Reagent B）和染色液（Reagent C）的染色工作液

16． 轻度涡旋震荡2秒

17． 在暗室里室温下孵育2分钟

18． 即刻移取50微升在载玻片上压片，

19． 在倒置荧光显微镜下进行观察：紫外波长350nm（细胞核呈现蓝色）

20． 或即刻进行细胞流式仪分析：紫外波长350nm，观察50000个细胞以上

注意事项

1． 本产品为100次（8个12孔细胞培养板）操作

2． 所有操作均须无菌状态下进行

3． 确保实验准确性，须收集所有悬浮和贴壁细胞；同时要确保足够的细胞数

4． 可用35mm培养皿、6孔培养板或25cm²细胞培养瓶操作，相应增加染色液的用量。但12孔培养板为理想选择

5． 操作时，须戴手套

6． 孵育时，须避免光照

7． 建议细胞染色完成后，即刻进行分析；若暂不观察，可保存在4℃冰箱里，但不宜超过1周

8． 细胞核呈现多个散在块状结构，为细胞凋亡

9． 细胞流式仪分析前，须混匀内容物

10． 细胞流式仪分析，细胞检测量不得少于10000个

11． 告知流式仪技术员有关细胞类型

12． 本公司提供系列细胞核染色分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰

使用cheng诺

极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量cheng诺”的宗旨为我们的用户提供you质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，bao证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

G&VS10023.1A    清理液（Reagent A）                       毫升

试剂盒订购信息

原创作者：上海极威生物科技有限公司