资料简介：  SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS50556.2 v.A

组织铜离子浓度比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

组织铜离子浓度比色法定量检测试剂是一种旨在通过偶氮生色底物，与还原后的一价铜反应产生蓝色螯合

复合物，在分光光度仪下通过吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中总铜浓度的权威而经典的技术

方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体组织裂解悬液样品中总铜的浓度

检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

技术背景

铜为人体营养中的必需的微量元素。作为辅因子，含铜酶蛋白在铁和儿茶酚胺（catecholamine）代谢、游

离自由基清除、血红蛋白、弹力纤维和胶原蛋白合成等活动中起着重要作用，从而调节体内氧化还原状态

铜在肝脏和血浆中以铜蓝蛋白（caeruloplasmin）形式存在，具有铁氧化酶抗氧化活性。铜含量过低，会导

致智力迟钝、色素脱失、贫血、张力减退、骨坏血病变化。一旦缺失，将导致心脏病变、骨质疏松、骨关

节炎、Menkes综合征、威尔森氏症等。由此，铜含量检测成为威尔森氏症、小细胞低色素性（microcytic

hypochromic anemia）贫血、骨病等的诊断指标。铜的检测包括化学法、火焰光度法（flame photometry）、

原子吸收分光光度法等技术，但容易受到其它金属元素的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求。4-(3,5-溴

基-2-吡啶偶氮基)-5-(N-乙基-N-磺丙基)苯胺（4-(3,5-Bromo-2-pyridylazo) -5-(N-ethyl-N-sulfopropyl)aniline；

Di-Br-PAESA）比色法是一种稳定、简便、准确的铜检测技术。在弱酸性条件下，铜从复合物中解离出来；

抗坏血酸（还原型）将解离出来的二价铜离子还原成一价铜离子，一价铜离子与显色剂DiBr-PAESA生成

蓝色络合物，在分光光度仪下通过吸光峰值的变化（波长580nm），来定量测定细胞铜的总浓度。其反应

系统为：

产品内容

清理液（Reagent A） XX 毫升

裂解液（Reagent B） XX 毫升

去干扰液（Reagent C） XX 毫升

缓冲液（Reagent D） XX 毫升

还原液（Reagent E） XX 瓶

显色液（Reagent F） XX 毫升

标准液（Reagent G） XX 微升

产品说明书1 份

保存方式

保存在4℃冰箱里，有效保证3 月

用户自备

15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器

DOUNCE 匀浆器：用于组织匀化

微型台式离心机：用于样品制备

比色皿：用于反应的容器

分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

一、样品准备

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定500 毫克组织重量

2． （选择步骤）放进预冷的15 毫升锥形离心管

3． （选择步骤）加入XX 毫升清理液（Reagent A）清洗1 次

4． 移入到一个液氮冻存管

5． 即刻放进液氮罐过夜

6． 次日从液氮罐里取出，即刻（*快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）

7． 放进一个15 毫升锥形离心管

8． 加入预冷的XX 微升裂解液（Reagent B）

9． 涡旋震荡5 秒，充分混匀

10．即刻放进预冷的DOUNCE 匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约40 下）

11．转移到预冷的1.5 毫升离心管

12．放进4℃微型台式离心机离心5 分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

13．小心移取500 微升上清液到新的预冷的1.5 毫升离心管

14．移取10 微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）

15．加入XX 微升抗干扰液（Reagent C）

16．涡旋震荡10 秒

17．放进4℃微型台式离心机离心10 分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

18．小心移取上清液到新的1.5 毫升离心管

19．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、测定准备

1． 准备好待测样品，置于冰槽里备用

2． 设定好分光光度仪：波长580nm（570 至590nm 波长），并置零

3． 实验开始前，移取XX 毫升缓冲液（Reagent D）到1 瓶还原液（Reagent E）中，混匀后，标记为反

应工作液，置于冰槽里备用，避免光照。

三、比色测定

1． 移取XX 毫升上述配制的反应工作液到新的1 毫升比色皿

2． 加入XX 微升标准液（Reagent E）或待测样品

3． 上下倾倒数次，混匀

4． 37℃室温下孵育5 分钟，避免光照

5． 即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数（OD）

6． 计算样品铜浓度

XX

注意事项

1． 本产品为20 次操作，包括标准液

2． 本产品线性范围为3 至400 微克/分升

3． 操作时，须戴手套

4． 避免使用EDTA 等处理样本

5． 系统操作过程中，标准液测定只需1 次

6． 孵育反应完成后即刻进行比色测定

7． 比色测定后，比色皿须清洗彻底

8． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

9． 用户可以换算获得：微克/毫克组织或蛋白；微摩尔/毫克组织或蛋白

10．微克/分升换算成微摩尔/升：微克/分升X 0.1573

11．建议用户建立正常参考值

12．本公司提供系列铜生化检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照

产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书

所述的使用效果。在货到后10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公

司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，

本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

4

单组份订购信息

编号名称规格

GMS50556.2 组织铜离子浓度比色法定量检测试剂盒20 次

GMS50556.2A 清理液（Reagent A） 100 毫升

GMS50556.2B 标准液（Reagent B） 50 毫升

GMS50556.2C 去干扰液（Reagent C） 5 毫升

GMS50556.2D 反应液（Reagent D） 20 毫升

GMS50556.2E 标准液（Reagent E） 200 微升

试剂盒订购信息

产品编号名称规格

GMS50556.1 细胞铜离子浓度比色法定量检测试剂盒20 次

GMS50556.2 组织铜离子浓度比色法定量检测试剂盒20 次

GMS50556.3 体液铜离子浓度比色法定量检测试剂盒20 次

GMS50556.4 食物铜离子浓度比色法定量检测试剂盒20 次

GMS50556.5 环境铜离子浓度比色法定量检测试剂盒20 次

GMS50557.1 细胞铜离子浓度荧光定量检测试剂盒20 次

GMS50557.2 组织铜离子浓度荧光定量检测试剂盒20 次

GMS50557.3 体液铜离子浓度荧光定量检测试剂盒20 次

GMS50557.4 食物铜离子浓度荧光定量检测试剂盒20 次

GMS50557.5 环境铜离子浓度荧光定量检测试剂盒20 次