资料简介：  主要用途

活体细胞线粒体内膜功能（膜电位）荧光测定试剂是一种旨在通过高度敏感的阳离子荧光羰花青染料结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体膜电位的变化，即内膜电负性的增高或降低，来分析线粒体内膜功能的完整性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体制备物的功能检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老等的研究。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作极为简易，性能稳定。

技术背景

阳离子荧光羰花青染色剂JC-1（5,5＇,6,6＇-tetrachloro-1,1＇,3,3＇-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide）是一种对膜电位高度敏感的染色剂。它特异性地进入线粒体，分布和结合在线粒体基质上。线粒体膜电位的高低变化决定了JC-1的分布浓度。电位高，JC-1形成聚集体，而浓度高，荧光显色为红色或桔红色；反之，则为绿色。荧光减弱表明线粒体内膜功能受到损害。 

产品内容

染色液（Reagent A）   微升

稀释液（Reagent B）   毫升

清理液（Reagent C）   毫升

产品说明书   1份

保存方式

保存清理液（Reagent C）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent A）避免光照；有效保证6月

用户自备

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离

完全细胞培养液（G&VS12052）：用于细胞脱落收集

1.5毫升离心管：用于活体细胞线粒体染色的容器

微型台式离心机：用于细胞收集的操作

培养箱：用于染色孵育

（共聚焦）荧光显微镜：用于活体细胞线粒体荧光定性分析

比色皿或96孔板：用于荧光定量分析的容器

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于活体细胞线粒体荧光定量分析

细胞流式仪：用于活体细胞线粒体荧光分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent A）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent B）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（Reagent A）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升稀释液（Reagent B），混匀后，在冰槽里静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

一、直接法

1． 准备1个12孔细胞培养板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约30万细胞数）

2． 小心抽去细胞培养液

3． 轻轻沿着孔壁加入xx毫升 清理液（Reagent C）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面

4． 小心抽去xx毫升 清理液（Reagent C）

5． 加入xx微升含有染色液（Reagent A） 和稀释液（Reagent B）的染色工作液，覆盖培养孔表面

6． 放进37℃细胞培养箱里，孵育20分钟（注意避光）

7． 小心抽去xx微升染色工作液

8． 小心加入xx微升清理液（Reagent C）（注意：检测前置于冰槽里）

9． 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察（单滤波或双滤波）：

二、间接法

1． 准备1个12孔细胞培养板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约30万细胞数）

2． 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集悬浮细胞）

3． 加入xx毫升 清理液（Reagent C）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面

4． 小心移出xx毫升 清理液（Reagent C）到15毫升锥形离心管（收集洗脱细胞）

5． 加入500微升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养孔表面

6． 置入37℃培养箱1分种

7． 轻轻抖动培养板，使细胞脱落，然后加入1毫升完全细胞培养液

8． 移入15毫升锥形离心管

9． 放进 台式离心机离心5分钟，速度为300g

10． 小心抽去上清液

11． 加入xx微升清理液（Reagent C）

12． 用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群

13． 转入到1.5毫升离心管或细胞流式仪专用测试管

14． 加入xx微升含有染色液（Reagent A） 和稀释液（Reagent B）的染色工作液

15． 轻度涡旋震荡2秒

16． 放进37℃细胞培养箱里，孵育20分钟（注意避光）

17． 放进 台式微型离心机离心5分钟，速度为300g

18． 小心抽去上清液

19． 加入xx微升清理液（Reagent C）（注意：检测前置于冰槽里）

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