资料简介：  β-试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

冰冻切片组织衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂是一种旨在以X-Gal为底物，通过切片组织内β-半乳糖苷酶在酸性条件下稳定表达，催化生成深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的组织细胞作为组织复制性衰老（replicative senescence）的分子特征来识别和探测衰老组织细胞的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于细胞生物学研究。其适用于各种人体和动物的冰冻组织切片。产品即到即用，性能稳定，参数优化，着色敏感。  

技术背景

细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，尤其在酸性条件下，细胞内源性β-半乳糖苷酶活性增加，而成为细胞衰老的生物学标记。 

产品内容

清理液（Reagent A）    毫升

固定液（Reagent B）  毫升

酸性液（Reagent C）  毫升

稀释液（Reagent D）  毫升

染色液（Reagent E）  毫升

产品说明书         1份 

保存方式

保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀释液（Reagent D）和染色液（Reagent E）用铝箔封裹，避免光照；有效保证6月 

用户自备

15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液

恒温培养箱：用于染色孵育

光学显微镜：用于观察染色后的组织细胞

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到15毫升锥形离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，置入37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。然后进行下列操作：

1． 准备10片待测的厚为5至10微米的冰冻切片

2． 置于室温下，小心加上xx微升预冷的清理液（Reagent A），铺满整个切片表面

3． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

4． 小心加上xx微升预冷的固着液（Reagent B），铺满整个样品表面

5． 室温下孵育10分钟

6． 小心移去切片上的固着液（Reagent B）

7． 小心加上xx微升酸性液（Reagent C），铺满整个切片表面

8． 室温下孵育5分钟

9． 小心移去切片上的酸性液（Reagent C）

10． 重复实验步骤7至9二次

11． 小心加上xx微升预热的染色工作液，铺满整个切片表面

12． 在37℃湿润培养箱里，孵育3至24小时，或组织细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）

13． 小心移去切片上的染色工作液

14． 小心加上xx微升清理液（Reagent A），铺满整个切片表面

15． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

16． 放上盖玻片或封片

17． 即刻在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶活性的地方，呈现蓝色。

注意事项

1． 本产品为50次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 本产品的参数：固着剂种类和浓度、pH、生色底物的选择和浓度等达到*优化

4． 使用时，避免污染母液，否则出现絮状沉淀，影响实验效果

5． 染色工作液避免光照

6． 切片染色时，须避免光照

7． 染色后的样品可以在4℃冰箱里长期保存，同样须避免光照

8． 组织细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3小时即显示阳性；组织细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24小时

9． 组织细胞染色*长孵育时间为24小时

10． 本产品染色敏感，甚至对于微弱表达的酶活性仍然显色清晰；用户可以根据实际情况调整孵育时间和染色工作液浓度，使染色恰到好处

11． 孵育时避免液体蒸发

12． 组织细胞呈现蓝色的部位为衰老组织细胞特异性β-半乳糖苷酶活性的地方

13． 本公司提供系列细胞衰老检测试剂产品

上海极威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，主营产品有elisa试剂盒，大鼠elisa试剂盒，小鼠elisa试剂盒，动物血清，细胞株，标准品，生化试剂盒等。