资料简介：  通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂是一种旨在以X-Gal为底物，通过组织/细胞内β-半乳糖苷酶在酸性条件下稳定表达，催化生成深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞作为细胞复制性衰老（replicative senescence）的分子特征来识别和探测衰老细胞的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于细胞生物学研究。其适用于各种人体和动物细胞、活体组织以及冰冻组织切片检测。产品即到即用，性能稳定，参数优化，着色敏感。

技术背景

细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，尤其在酸性条件下，细胞内β-半乳糖苷酶活性增加，而成为细胞衰老的生物学标记。

产品内容

清理液（Reagent A）  毫升

固定液（Reagent B） 毫升

酸性液（Reagent C） 毫升

稀释液（Reagent D） 毫升

染色液（Reagent E） 毫升

产品说明书       x1份

保存方式

保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀释液（Reagent D）和染色液（Reagent E）用铝箔封裹，避免光照；有效保证6月

用户自备

2毫升离心管：用于配制染色工作液

15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液

恒温培养箱：用于染色孵育

切片仪：用于石蜡或冰冻切片

光学显微镜：用于观察染色后的细胞

实验步骤

一、 细胞染色

操作一、25cm²细胞培养瓶染色

实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到2毫升离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。然后进行下列操作：

1． 小心抽去25cm²细胞培养瓶里的培养液

2． 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面

3． 小心抽去清理液

4． 小心加入xx毫升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面

5． 在室温下孵育5分钟

6． 小心抽去固定液

7． 小心加入xx毫升酸性液（Reagent C），清洗细胞表面

8． 小心抽去酸性液

9． 重复实验步骤7和8两次

10． 小心加入xx毫升预热的染色工作液，覆盖整个细胞表面

11． 放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）

12． 在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色

操作二、24孔细胞培养板染色

实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到15毫升锥形离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。然后进行下列操作：

1．小心抽去24孔细胞培养板里的培养液

2．每孔加入xx微升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面

3．小心抽去每孔里的清理液

4．每孔加入xx微升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面

5．在室温下孵育5分钟

6．小心抽去固定液

7．每孔加入xx微升酸性液（Reagent C），清洗细胞表面

8．小心抽去酸性液

9．重复实验步骤7和8一次

10．每孔加入xx微升预热的染色工作液，覆盖整个细胞表面

11．放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）

12．在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色

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