资料简介：  纯化线粒体内膜功能/膜电位荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

纯化线粒体内膜功能/膜电位荧光测定试剂是一种旨在通过高度敏感的阳离子荧光羰花青染料结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体膜电位的变化，即内膜电负性的增高或降低，来分析线粒体内膜功能的完整性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体制备物的功能检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老等的研究。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作极为简易，性能稳定。

技术背景

阳离子荧光染色剂羰花青（5,5＇,6,6＇-tetrachloro-1,1＇,3,3＇-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide）是一种对膜电位高度敏感的染色剂。它特异性地进入线粒体，分布和结合在线粒体基质上。线粒体膜电位的高低变化决定了羰花青的分布浓度。电位高，羰花青形成聚集体，而浓度高，荧光显色为红色或桔红色；反之，则为绿色。荧光减弱表明线粒体内膜功能受到损害。

产品内容

保存液（Reagent A）   毫升

染色液（Reagent B）   微升

稀释液（Reagent C）   毫升

产品说明书   1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent B）避免光照；有效保证12月

用户自备

1.5毫升离心管：用于线粒体染色的容器

比色皿或96孔板：用于荧光定量的容器

（共聚焦）荧光显微镜：用于线粒体荧光定性分析

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于线粒体荧光定量分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent C）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升稀释液（Reagent C），混匀后，在冰槽里静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

一、（共聚焦）荧光显微镜观察（大量检测）

1． 从纯化的线粒体样品中移出至少含10⁷细胞中提取的线粒体到新的预冷的1.5毫升离心管，置入冰槽里

2． 加入适量的保存液（Reagent A）至*终容量为100微升（含有50微克线粒体蛋白质为理想状态）

3． 加入xx微升含有染色液（Reagent B） 和稀释液（Reagent C）的染色工作液，轻柔混匀

4． 放进暗室里，在室温下孵育10分钟（注意：检测前置于冰槽里）

5． 即刻移入到载玻片上

6． 放上盖玻片，在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察（单滤波）：

观察红色荧光：滤波器激发波长490nm，散发波长590nm或罗丹明（rhodamine）滤波器激发波长540nm，

散发波长570nm或德州红（Texas Red）滤波器激发波长590nm，散发波长610nm――

二、（共聚焦）荧光显微镜观察（小量检测）

1． 从纯化的线粒体样品中移出10微升纯化线粒体（含有5微克线粒体蛋白为理想状态）到新的预冷的1.5毫升离心管，置入冰槽里

2． 加入xx微升含有染色液（Reagent B） 和稀释液（Reagent C）的染色工作液，轻柔混匀

3． 放进暗室里，在室温下孵育10分钟（注意：检测前置于冰槽里）

4． 即刻移入到载玻片上

5． 放上盖玻片，在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察（单滤波）：

观察红色荧光：滤波器激发波长490nm，散发波长590nm或罗丹明（rhodamine）滤波器激发波长540nm，

散发波长570nm或德州红（Texas Red）滤波器激发波长590nm，散发波长610nm――

三、荧光酶标仪检测

1． 分别加入xx微升含有染色液（Reagent B）和稀释液（Reagent C）的染色工作液到96孔板的每个孔里

2． 加入10微升纯化的线粒体样品（含有5微克线粒体蛋白为理想状态）

3． 轻轻摇匀96孔板

4． 放进暗室里，在室温下孵育10分钟（注意：检测前置于冰槽里）

5． 即刻放进荧光酶标仪测定（单一测定）： 

激发波长490nm，散发波长590nm，获得相对荧光单位（RFU）：

三、荧光分光光度仪比色皿检测

1． 从纯化的线粒体样品中移出至少含10⁷细胞中提取的线粒体到新的预冷的1.5毫升离心管，置入冰槽里

2． 加入适量的保存液（Reagent A）至*终容量为100微升（含有50微克线粒体蛋白为理想状态）

3． 加入xx微升含有染色液（Reagent B） 和稀释液（Reagent C）的染色工作液到1毫升比色皿里（若使用2毫升比色皿，用量相应加倍）

4． 加入100微升纯化的线粒体样品

5． 上下倾倒比色皿，轻轻混匀

6． 放进暗室里，在室温下孵育10分钟（注意：检测前置于冰槽里）

7． 即刻放进荧光分光光度计测定（单一测定）： 

激发波长490nm，散发波长590nm，获得相对荧光单位（RFU）：

订购信息

编号名称规格

G&VS10013.1纯化线粒体内膜功能/膜电位荧光测定试剂盒10/100次

G&VS10013.1A保存液（Reagent A）5毫升

G&VS10013.1B 染色液（Reagent B）   500微升

G&VS10013.1C 稀释液（Reagent C）    50毫升

G&VS12042缬氨霉素溶液（0.1 mM）    10毫升

G&VS30030.1 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒100次