3.   预处理后的样本无需稀释，直接取 10 μ L 加样即可。

4.   严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.   所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成

注：标准品浓度依次为：  8、4 、2 、  1、0.5 、0 U/mL.

试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释：  蒸馏水按 1：  20 稀释，  即 1 份的 20×洗涤 缓冲液加 19 份的蒸馏水。

洗板方法

1.   手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽 孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。

2.    自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

操作步骤

1.   从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条， 剩余板条用自封 袋密封放回 4℃。

2.   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50 μ L；

3.   待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40 μ L；

4.    随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记 的检测抗体 100 μ L ，用封板膜封住反应孔，  37℃水浴锅或恒温箱温 育 60min。

5.   弃去液体，吸水纸上拍干，  每孔加满洗涤液，静置  1min，甩去 洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。

6.   每孔加入底物 A 、  B 各 50 μ L，  37℃避光孵育 15min。