人可溶性核因子 κB 受体活化因子配基（sRANKL）ELISA 检测试剂盒

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人可溶性核因子κB受体活化因子配基（sRANKL）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人可溶性核因子κB受体活化因子配基（sRANKL）呈正相关。用酶标仪在450nm  波长下测定吸光度（OD  值），计算样品浓度。

-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

3. 预处理后的样本无需稀释，直接取 10μL 加样即可。

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

2. 自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；

3. 待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；

4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体  100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。

6. 每孔加入底物A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。