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THERMOscript One Step qRT-PCR Kit(一步法荧光定量耐热反转录PCR试剂盒)说明书
点击次数：1127发布时间：2015/10/28 6:14:36
更新日期：2016/7/2 7:22:32
所 在 地：中国大陆
产品型号：PC4201
优质供应
详细内容
名称：THERMOscript One Step qRT-PCR Kit(一步法荧光定量耐热反转录PCR试剂盒)说明书
产地：国产|进口
规格：50次×50μl|100次×50μl
编号：PC4201
品牌：百奥莱博
产品组成、储存、浓度：
储存：－20℃ 保存，有效期12个月。
制品说明：本制品是采用SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR 的专用试剂，用本制品进行Real Time qRT-PCR 可在同一反应管内连续进行。反应过程中无需打开管盖添加试剂并可对扩增产物进行实时检测，避免了污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。非常适合于微量RNA 尤其是微量RNA病毒的检测。本试剂盒包括*适合Real Time PCR的突变改造M-MuLV H Minus逆转录酶(THERMOscript RTase)、热启动HotMaster Taq DNA聚合酶和RNasin抑制剂mix、同时包含适用于逆转录和PCR扩增的优化独特反应体系。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性。同时该酶多点突变提高了耐热性，可以在50℃反转录，提高了复杂二级结构，GC含量丰富模板反转录效率。而采用优质热启动酶HotMaster Taq DNA Polymerase可以限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生，大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。
适用范围：适用于高拷贝、低拷贝基因检测；部分高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板。
注意事项：
● 当同时需要进行数次Real Time One Step qRT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液（Master Mix，其中包括RNase-free ddH2O、Buffer、各种酶等），然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。
● 使用Enzyme Mix和TRUEscript RTase时，分取之前要小心地瞬间离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有高浓度的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
● 2×qRT-PCR Mix内含Sybr Green I，保存或配制One Step qRT-PCR反应液时应避免强光照射。
● 本制品不含Rox Reference Dye，部分需要用Rox染料校准孔间差异的荧光定量PCR仪器可另外选购Rox Reference Dye（货号PC38）。
● 为保证反应成功建议使用高质量的RNA模板。
● 不同的片段，所需*佳RNA模板用量不同，过多的RNA会抑制反应，建议根据反应调整模板用量。
● 只能使用特异性引物，不能使用Oligo(dT) 和Random Primer 进行反应。.jpg)
除THERMOscript One Step qRT-PCR Kit(一步法荧光定量耐热反转录PCR试剂盒)说明书外，我公司正在打折促销以下产品：
·3＇-RACE试剂盒
编号：BTN101104
英文名称：3＇-RACE Kit
规格：10次
产品简介:
研究真核基因的*基础的工作就是确定其转录终止位点,目前*通用的方法是3＇-RACE法,RACE(Rapid-Amplification of cDNA Ends)是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术,它在不建立cDNA文库的前提下,利用已知cDNA序列设计引物,通过往两端延伸和扩增获得其3＇-端序列。
使用及效果:
先用3＇-RACE引物A作为引物将mRNA反转录成cDNA,然后再使用3＇-RACE引物B引物和自备的基因专一性引物进行轮PCR,再用PCR产物为模板,用3＇-RACE引物C和自备的基因专一性巢式引物进行第二轮PCR(巢式PCR),PCR产物即可用于后续试验。
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,有效期一年。
·非冻型细菌RNA保存液
编号：BTN80601
英文名称：Bacterial RNALOCKER
规格：100mL/250mL
产品简介:
用传统的RNA提取方法提取到的细菌RNA样品用于细菌基因表达谱研究时,不可避免地会遇到的一个问题,即得到的RNA材料并不能准确反映取样时细菌RNA的真实表达水平,原因是细菌RNA的半衰期非常短,一般只有几分钟,哪怕是经过短暂的离心弃培养基处理过程,细菌的RNA水平都会发生明显改变。另一原因是细菌对环境因素的改变非常敏感,温度、密度、离心力等条件的改变都会导致细菌基因表达的迅速改变。上述两因素的叠加就会使实际得到的RNA表达谱与真实的RNA表达谱之间存在巨大的误差,所以传统的处理方法不适合于细菌RNA表达谱研究。为解决此问题,本公司特推出本产品,它具有下列特点:
1.能快速渗透到液体培养基中的细菌内,抑制RNA分子的降解或表达谱的改变。
2.操作简单,直接将本产品和液体样品按比例混合即可。
3.适用于各种细菌(包括革氏阳性和革氏阴性),也适用于其他微生物样品,如真菌和藻类等。
4.重复性好,效果跟进口同类产品相当。
5.处理的样品可直接用于总RNA提取,也可以长期保存。
使用及效果:
将本产品预热到与样品相同的温度,然后按1/6的比例(6份菌液加1份本产品)迅速将本产品加到含细菌的液体培养基中,混匀5秒钟,室温放置5分钟,12000-15000 g 室温离心5分钟,沉淀即可用于细菌RNA提取。
运输及保存:
常温,有效期两年。
·凝固全血基因组DNA提取系统
编号：DN3101
英文名称：Bacterial RNALOCKER
规格：160次×50μl|320次×50μl
产品介绍：
本试剂盒根据凝固全血特点独家研制的细胞核裂解液配合蛋白酶K裂解凝固血块释放出基因组DNA, 然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，*后纯净的基因组DNA在Sigma的分子生物学级Glycogen的助沉下通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
产品特点：
1. 不需要使用有毒的苯酚等试剂。
2. 快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
3. 结果稳定，配合|Sigma的分子生物学级Glycogen帮助沉淀微量DNA，产量高，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。
THERMOscript One Step qRT-PCR Kit(一步法荧光定量耐热反转录PCR试剂盒)说明书关键词：THERMOscript One Step qRT-PCR Kit(一步法荧光定量耐热反转录PCR试,PC4201,百奥莱博.jpg)
·TBE电泳液,10×
编号：BTN90313
英文名称：TBE Buffer, 10×
规格：250mL/2500mL
产品简介:
TBE Buffer全名为Tris-Borate-EDTAbuffer。它主要用于DNA的琼脂糖电泳和DNA和RNA的PAGE电泳。跟TAE相比,其特点是含硼酸,可能会影响连接等后续酶反应。硅胶模回收时,回收率比TAE低。缓冲能力强于TAE,可反复使用几次。PAGE电泳使用1×,琼脂糖电泳可以使用0.5×。线性双链DNA的泳动速度慢于TAE。不要使用含甘油的上样品液,因为甘油可使硼酸多次解离,改变pH。
运输及保存:
常温,有效期一年。长时间放置可能会出现沉淀。
·β-巯基乙醇,蛋白级
编号：BTN131052
英文名称：β-Mercaptoethanol,Protein Grade
规格：10mL
产品简介:
本产品用于将蛋白质的二硫键剪切成巯醇的温和的还原剂。也称为β- 巯基乙醇或BME。经常加入到酶溶液中来防止由于半胱氨酸巯基氧化/ 二硫键形成造成的催化位点失活；经常作为添加的保护剂使用,终浓度为5 及20mM,含不含EDTA均可
运输及保存:
常温,有效期一年。
·EASYspin 植物RNA快速提取试剂盒
编号：RN0901
英文名称：β-Mercaptoethanol,Protein Grade
规格：20次|50次
产品介绍：
独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， *后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚，氯坊等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
4.独有的植物RNA助提剂可以有效结合多糖多酚,提高清除效果。
5.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。
很多植物RNA的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分，造成RNA提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更加复杂。手工的CTAB类的方法提取因为时间太长，太繁琐，手工方法不在讨论之列。一直以来没有一款好的试剂盒包括qiagen、promega等进口试剂盒也无法满足科研工作者对植物RNA提取的要求。
下面我们来分析一下植物RNA为什么不能提取成功的原因：
市面上*常见的RNA提取试剂盒无非是两种：种：TRIzol改良类方法（包括溶液型的和离心柱型的）、第二种：直接裂解过柱子的方法（离心柱）
种试剂盒失败的原因1：RNA市面上面*流行的方法就是Trizol，或者Triol改良，或者Trizol加离心柱一类的改良方法。trizol也就是异硫氰酸胍/苯酚/氯坊原理一步法的方法*适合的对象是动物源性的组织细胞，针对普通多糖多酚低的植物性的材料，TRIzol类原理产品也可以提取。但是多糖、多酚、次级代谢产物丰富的情况下，trizol类方法无法防止多糖多酚对于RNA/DNA分相的干扰，要么残留大量DNA，要么残留大量多糖、多酚或者次级代谢产物，氧化破坏RNA，或者残留这些多糖多酚，色素代谢产物等抑制下游的反转录等反应。限于技术水平的限制，市面上绝大多数的国产厂家是使用trizol的方法进行改良，无论是不是加了离心柱。但是实践证明，改良不能从根本上解决问题。判断是否试剂盒使用这种改良的方法非常简单：是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯坊，如果使用到了氯坊就是TRIzol方法的改良。
第二种试剂盒失败的原因：直接裂解过柱子的方法是目前的方法，但是也是技术含量的方法。这个方法采用裂解液（不含苯酚，氯坊）直接裂解，RNA/DNA同时过柱子，然后在柱子上面直接分离RNA/DNA，所以，这种方法的优点在于，避免了使用trizol在多糖多酚下不能成功分离RNA/DNA的弊端、第二在于，不使用有毒的苯酚氯坊。但是正是因为其技术，所以难度很高，国内厂家包括进口公司有两个技术难点一直没有突破。，裂解液的成分必须针对去除多糖多酚进行研发添加去多糖多酚，代谢产物成分。否则会同样碰到多糖多酚干扰提取的问题。第二、和trizol原理不同，直接过柱法DNA/RNA同时加到吸附柱上去。如何去除DNA是个难点。否则会残留大量DNA。两个技术难点的没有掌握导致了国内公司包括的第二种试剂盒失败。国外公司因为没有掌握难点，裂解液里面没有去除多糖多酚成分，所以包括qiagen的盒子也常常不能成功提取植物RNA样品。
本人领衔和研发团队配合经过3年的不断研发改良，针对多糖多酚植物的特点，和这两种试剂盒失败的原因，开发出了EASYspin植物RNA快速提取试剂盒，采用直接过柱子方法，彻底抛弃了TRIZOL苯酚，氯坊原理方法，使用无毒原料，并且添加了有自主知识产权的去除多糖多酚成分解决了多糖多酚和代谢产物对于RNA的破坏和干扰分离。第二突破了直接过柱子的方法DNA去除的技术难点，解决了DNA残留过多问题。经过实践过程中，几十种国内试剂盒提取失败和进口试剂盒提取失败的例子，使用我们开发的试剂盒提取，除了一例因为离心柱子堵塞导致失败外，全部成功。而且，20分钟提取步骤非常简单，非常快速，无毒苯酚氯坊。全部提取成功的RNA可以成功完成下游反应试验。
部分成功样品：
植物：棉花、海棠、黑加仑、烟草、拟南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季花雌蕊、蔷薇、沙棘、冬枣、芦荟、仙人掌、报春花、水稻、玉米、唐菖蒲、樱桃、白玉兰、毛白杨、樱花、葡萄、百合花、百合叶子雌蕊雄蕊、紫菜、绿藻、香蕉、水仙花、青花菜、地被菊、苹果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苎麻、慈姑、葛根、甘肃桃、玫瑰花、槟榔果、甜糖菊、硅藻、牡丹、胡杨、油桐果、梨子皮、板栗花序、青皮云杉、红树根、铁线蕨、黄瓜、小麦叶子种子、番木瓜、甘薯、紫薯、油松、油茶、马尾松、芜菁、毛果杨、木薯、大叶落地生根、山杏、旱柳、桉树、琵琶花果、丹参、人参、西洋参、栀子、洋葱、红豆杉、梨树叶、五倍子、泡桐、西瓜、芍药等等，其中包括qiagen无法提取的黑加仑、冬青、月季、松针、葡萄叶片等，promega无法提取的海棠等样品、均可用该产品成功提取。
真菌：桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、菇类等。
·超螺旋DNA分子量标准
编号：BTN130960
英文名称：Supercoiled DNAMETER
规格：100uL
产品简介:
本产品由9种超螺旋质粒构成,产品浓度为500ug/mL,分子量大小从2到10kb,适用于琼脂糖凝胶电泳的超螺旋分子量标准。其中 5 kb 质粒对应的条带亮度增强可作为参考条带。
注意事项:
本产品可能含有极微量切刻 DNA 和大于 10 kb 的二聚体。为减少超螺旋 DNA被切刻,应使用无菌枪头分装并避免反复冻融。超螺旋质粒的迁移率会随琼脂糖凝胶浓度、电泳缓冲液和电泳条件的改变而变化。质粒应用 TE 或者其它低离子强度溶液稀释,dH2O 稀释会导致 DNA 降解。
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,有效期一年
THERMOscript One Step qRT-PCR Kit(一步法荧光定量耐热反转录PCR试剂盒)说明书关键词：THERMOscript One Step qRT-PCR Kit(一步法荧光定量耐热反转录PCR试,PC4201,百奥莱博.jpg)
·酸洗玻璃珠系列
编号：BTN100307
英文名称：Acid-Washed Glassbeads
规格：10g
产品简介:
本产品是用浓酸充分洗涤后的玻璃珠,它是玻璃珠法破碎细菌和真菌的必备成分,主要用于从具有坚硬外壁的微生物细胞(如真菌孢子、酵母细胞、结核细胞等)中提取DNA、RNA和蛋白质大分子,因为用其他方法,包括酶解方法都很难沉底破碎具有坚硬外壁的微生物细胞。本产品具有下列特点:
1.经过充分的酸洗,免去用户接触具有腐蚀性的浓酸。
2.用本产品破碎具有坚硬外壁的微生物细胞,属于物理方法,不但比温和的化学破壁法普适性更好、重复性更好,同时不需要使用酶,因此不容易被酶中的外源核酸或蛋白质污染。
3.用玻璃珠破碎法提取一个样品只需要10余分钟时间,非常快捷。注意:本产品需要跟本公司提供的裂解液、上柱液、离心吸附柱等配合使用才能用于核酸纯化。
4.一次可以处理5 mL的微生物样品。
使用方法及效果:
离心收集1-5 mL过了夜培养的真菌细胞,加入0.5 mL 溶液A和体积相当于0.5 mL的、直径为400 μm玻璃珠(大约0.5克),振荡器上以速度振荡10分钟,2000rpm离心2分钟,在上清中加入3倍体积的溶液B,上柱,用通用洗涤液洗两次,干甩一次,*后用50-100 μL DNA洗脱液洗脱基因组DNA待用。
运输及保存:
常温,保存期为两年。
·T4 核酸内切酶 V
编号：BTN130641
英文名称：T4 Endonuclease V
规格：2000U
产品简介:
本产品既有 DNA糖基化酶活性,又有 AP 裂解酶活性。16 KD 的蛋白质可识别因紫外线照射引起的 cis-syn 型环丁烷嘧啶二聚体。该酶在嘧啶二聚体的 5′端切割糖苷键,同时其内切酶活性切割 AP 位点上的磷酸二酯键。
本产品具体有下列用途:
1.DNA 损伤研究
2.单细胞凝胶电泳 (彗星实验)
反应条件:
1X 反应缓冲液+BSA [25 mM Na2PO4(pH 7.2),100 mM NaCl,1 mM EDTA,1 mM DTT]。加入100μg/ml BSA,37℃ 温育。
单位定义:
1 单位指 20 μl 反应体系中,37℃ 条件下,30 分钟内使超过95% 的 0.5μg 经紫外线照射诱变的超螺旋pUC19 DNA 变成切刻型质粒的酶量。切刻可通过琼脂糖凝胶电泳来检测。诱变后的质粒 DNA 平均含有 3-5 个嘧啶二聚体。稀释兼容性
Buffer 成分:
10 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,0.1 mM DTT,0.1 mM EDTA,50% Glycerol,pH 7.5 @ 25℃
备注:
温育时间应不超过 30 分钟,以取得*佳使用效果。
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,有效期一年。
·固相RNase清除剂
编号：BTN3090
英文名称：Surface RNase Erasol
规格：100mL/250mL
产品简介:
本产品是我公司独家开发的特殊的RNase灭活剂,它含有多种成分,能高效灭活固体表面的RNase污染,保障RNA工作环境的清洁。
1.高效,本产品原液能在5分钟内将固体表面的多达100μg的RNase彻底灭活,效力和速度远远高于常用的DEPC。此外还能灭活RNase T1,RNase H,BAL31,S1,Mung bean nuclease等RNase。
2.无毒,跟强致癌的DEPC不同,本产品对人体没有任何毒害。
3.使用简单,处理后不需要高压灭菌。
使用及效果
用本产品处理污染表面5分钟,再用本产品的1000倍稀释液清洗表面即可。处理水和溶液时,按1:1000的比例加入,混匀后放置24小时即可。
运输及保存:
常温运及保存,有效期两年。
·尼龙膜
编号：BTN101122
英文名称：Nylon Membrane(Pharmacia)
规格：1张
产品简介:
尼龙膜可用于蛋白和核酸的转换。尼龙膜比硝酸纤维素膜容易操作,与蛋白质或蛋白质-去污剂混合物有很高的结合能力。它灵敏度高,但背景也高,与阴离子染料(如考马斯亮蓝和氨基黑)有较强的结合能力,所以不能用阴离子染料在带正电的尼龙膜上蛋白质染色。带正电的尼龙膜还能有效结合低浓度的小分子蛋白质、酸性蛋白、糖蛋白和蛋白多糖。但当转移缓冲液中存在SDS时会造成蛋白质的泄漏,用甲醛可以提高蛋白质在尼龙膜上的保留指数。
运输及保存:
常温,有效期两年。.jpg)
我公司正在优惠促销核酸扩增(PCR)等系列产品，期待您的咨询选购THERMOscript One Step qRT-PCR Kit(一步法荧光定量耐热反转录PCR试剂盒)说明书。
