葡萄籽提取物OPC检测方法

【注明】本标准所用试剂，除特殊规定均为分析纯。水为蒸馏水或相应纯度水。

【仪器】紫外可见光光度UV-UNIC7200

【原理】原花青素在酸性条件下加热水解产生色素，此过程为定量反应。通过检测水解产物吸收波长下的吸光度对OPC进行定量。在吸光度0.2-0.7纳米范围内浓度和吸光度呈线性关系。

【试剂】甲醇（分析纯）    正丁醇（分析纯）    盐酸（分析纯） 硫酸铁铵（分析纯）

【步骤】

1.       配置试液

盐酸正丁醇：棕色瓶配液，取量筒量取95ml正丁醇，用吸管量取5ml浓盐酸，混合避光保存。

硫酸铵盐酸溶液：配置2mol/L的盐酸溶液〈17ml浓盐酸定容于100ml容量瓶：先取30-50ml水，再加17ml浓盐酸，加水到100ml定容〉，称取2g硫酸铁铵溶于配好的盐酸溶液，振荡混匀，避光保存。

2.       工作液配置

对照品溶液：称取10mg对照品，用50%甲醇溶液溶解，定容100ml.

样品溶液：称取10mg样品，用50%甲醇溶液溶解，定容100ml.

3.       溶液配置

准备7支10ml具塞玻璃刻度试管，各加0.2ml硫酸铁铵盐酸溶液，6ml正丁醇盐酸溶液，然后三支试管加入1ml待测样品溶液，三支试管加入对照品溶液，一支加入1ml 50%甲醇。

加塞，振荡混匀，记录下7支试管溶液体积。

松下试管塞，沸水锅中反应40分钟（95度以上），然后取出，冰水冷却，记录试管*终体积。

紫外分光光度仪，调节至546纳米，分别测出溶液吸光度。

（玻璃比色皿取样要先润洗、保持光面洁净，取样体积3/4）

【计算】

样品OPC含量=  标品含量*样品吸光度*对照品称取量*样品溶液*终体积

/（对照品吸光度*样品称取量*对照品溶液*终体积）

样品称取量见步骤2

*终体积计算公式：7.2ml*加热后体积 / 加热前体积

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