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羧基磁珠在生物医学中的应用
在过去的30年里,磁性微球因其宏观磁性,在磁场下可以方便的操控、方便快速的实现固液分离、可量化、可自动化等特点,己经被广泛地应用于生物医药和生物工程领域。其中,磁球*主要的实际应用为细胞分离、核酸提取和免疫检测等。
一、细胞分离
细胞磁性分离的原理是将生物分子亲和反应的专一性和固定化生物分子易于分离的特点结合起来,首先在磁球表面修饰上具有生物活性的吸附剂或配体(如抗体、外源凝结素等)活性物质,并利用其与目标细胞的特异性结合,然后在外磁场的作用下,这些结合在磁珠上的细胞可发生定向移动,从而实现分离的目的。一般采用正向选择(直接获取所需细胞)或负向选择(除去不需要的细胞)两种策略,以实现细胞分离。Kemshead等在磁珠表面偶联上单克隆抗体,利用磁性分离从骨髓中成功分离出成神经瘤细胞。磁性细胞分离与传统的分离方法相比具有以下优点:
1、可以将目标细胞从原样液中直接分离;
2、方法简单,可快速地实现高选择性分离;
3、易于实现自动化、大规模细胞分离。
二、核酸提取
传统的核酸提取技术存在耗时多、低产率、分离不完全、难大规模自动化、等缺点,而使用磁性微球进行核酸磁性分离则可以有效的避免这些局限。基于磁性分离的核酸提取的主要原理为:在高盐浓度的环境下,表面修饰后的磁性微球可通过氢键作用非特异性地吸附DNA,而对蛋白质和其他细胞裂解物则不存在吸附作用。经清洗后,在低盐浓度环境下核酸从磁球表面洗脱下来,从而提取核酸。与传统方法相比,核酸磁分离提取技术具有以下几大优势:核酸能够从血液、组织匀浆、培养媒介等原样中直接分离提取;对每次操作的样品体积量无严格限制;操作简单、迅速,易于实现自动化高/低通量提取。
三、免疫检测
磁性免疫检测以磁性微球为固相载体,首先在磁性微球表面经过一定的处理修饰上特定的抗原或抗体形成免疫性磁珠,然后加入待检样本使磁珠与样品混匀或接触,样品中的待测物质与微球表面的抗体或抗原特异性结合,形成免疫磁珠一抗原或抗体复合物,再利用各种手段在对应的检测物上标记上荧光、放射性同位素等物质,在磁场作用下,对复合物从样本中分离出来,检测相应的荧光、放射性等信号进而确定待测样品中所需检测物的含量与其它固相载体相比,磁性微球作为载体的检测系统具有快速高效、操作简单、重复性好、易自动化等优点。
综上所述,随着磁性微球在生物医学领域应用优越性的逐渐突显,越来越多的科研工作者将目光投向了磁性微球的应用上面,越来越多的体外诊断企业公司也在不断寻找均一稳定,价格适中,能大批量供应的羧基磁珠,用以开发新型的诊断试剂盒、免疫试纸条等产品。上海羧菲生物医药科技有限公司在基于上海交通大学纳米生物医学研究中心的技术上,在磁球的结构、尺寸及分布、表面性能、磁性能等方面都取得了可喜的成果。开发了一款粒径均一稳定、羧基含量高、单批生产规模能达到5g以上的羧基磁珠,已有不少体外诊断企业将其应用在体外诊断中。
透射电镜照片和饱和磁化曲线
羧菲公司羧基磁珠产品列表:
产品名称 | 型号 | 规格 | 包装 | 单价 |
羧基磁珠-100nm | CSMN Beads-100 | 10mg/ml | 5ml | ¥1,200.00 |
| 50ml | ¥6,000.00 | ||
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| >500ml | 面议 |
羧基磁珠-250nm | CSMN Beads-250 | 10mg/ml | 5ml | ¥1,200.00 |
| 50ml | ¥6,000.00 | ||
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| >500ml | 面议 |
羧基磁珠-500nm | CSMN Beads-500 | 10mg/ml | 5ml | ¥1,200.00 |
| 50ml | ¥6,000.00 | ||
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| >500ml | 面议 |
羧基磁珠-1um | CSMN Beads-1000 | 10mg/ml | 5ml | ¥1,200.00 |
| 50ml | ¥6,000.00 | ||
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| >500ml | 面议 |
具体参数信息:
货号 | PW014-5 |
磁核 | 四氧化三铁 |
浓度 | 10mg/ml 可定制 |
磁含量 | >70wt% |
平均粒径 | 100nm\250nm\500nm\1um 可定制 |
表面基团 | 羧基 |
比饱和磁化强度 | >60eum/g |
羧基含量 | ~700umol/g |
保质期 | 2年 |
保存条件 | 4度冰箱 |
产品优点:
Ø 高磁含量、高饱和磁化强度;
Ø 表面羧基功能化可直接用于生物偶联;
Ø 粒径分布均一、水分散性良好、稳定性好;
应用方向:
Ø 蛋白纯化
Ø 免疫检测
Ø 细胞分选
Ø 特异性核酸分离
Ø 生物传感器
Ø 药物筛选和输送
应用实例
摘要:目的采用碳二亚胺/N-轻基唬琅酞亚胺(EDC/ NHS)方法在竣基磁珠表而偶联抗体.制备可高效分离细胞的免疫磁珠方法用EDC和NHS活化磁珠表而竣基.活化的竣基再与抗体上氨基进行反应.从而将抗体偶联于磁珠表而.获得免疫磁珠使用高性能纳米粒度分析仪(HPPS)、二辛可酸(BCA)蛋自定量试剂盒、流式细胞仪、透射电镜(TED'I)表征磁珠的粒径、磁珠表而联接的抗体量及其免疫活性结果H PPS检测磁珠平均水力学粒径为110nm;磁珠表而偶联52. 4 ug抗CD11a+抗体/mg磁珠。经磁分离后细胞的流式分析结果表明.CDlla+免疫磁珠可以有效分离髓系自血病细胞系(KG-1a)细胞。免疫磁珠均匀结合于细胞表面,且不影响细胞的活性
结论:成功制备可用于细胞分离且不影响分离后细胞活性的新型免疫磁珠
来源:[1]刘辉荣,徐宏,古宏晨,卢瑛,王玲,侯盛. 简便高效分离细胞新型免疫磁珠制备[J]. 中国公共卫生,2008,11:1349-1351.
关于羧菲
上海羧菲生物医药科技有限公司发源于上海交通大学生物医学工程学院纳米生物医学研究中心。公司的技术团队基本由纳米生物医学研究中心的师生组成,我们的团队在纳米材料的研究方面有多年心得。以纳米材料的制备为基础,以纳米材料在生物医学领域的应用为方向,发展了一系列处于前列的纳米材料,其中纳米羧基磁珠是重要的一块。目前我们已经掌握了稳定制备1微米以内的纳米磁珠的方法,可实现粒径从30纳米到1um的可控制备,而且得率很高,现有规模可以一次制备5g左右的羧基磁珠,在生产能力方面有很强的拓展性。