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如何掌握ELISA检测系统的关键要素

点击次数:177 发布时间:2016/2/17 10:31:48
 

   在ELISA检测系统的关键要素中,包被原的性质很重要,蛋白浓度,是否降解,这关系到你做出的抗体可不可以被其识别,所以保留抗原很重要,做重组蛋白时,一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲,从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。但有时因为试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。

    试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。该法适于测定细胞培养上清、血清、血浆及组织液中的样本,干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子(或受体)的水平。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体;②酶标记的抗原或抗体;③酶作用的底物。
    根据elisa试剂盒试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。
(1) 双抗体夹心法;
(2) 双位点一步法;
(3) 间接法测抗体;
(4) 竞争法;
(5) 捕获法测IgM抗体;
(6) 应用亲和素和生物素。
试剂盒普遍用作非放射性同位素的成键化验。在这种方法中,通常标准配体是固定的,通过加入溶液相受体或蛋白质来使之成键。通过加入与受体特异性反应的抗体来定量成键的受体,而且*初抗体的量以加入第二种能显色的抗体测量。第二种抗体能识别抗体的末端,在其末端的碱性磷酸酯或过氧化物酶等与酶发生反应,从而使溶液显色。

 

原创作者:北京雅安达生物技术有限公司

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