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性能
提供两种实验方案,扩增时间不同。标准2小时扩增反应方案,每50 µl反应体系的常规产量为10 µg,高产量反应(8小时扩增)可得到40 µg产物。
原理
用于基因分型研究的基因组DNA量通常不足。全基因组扩增(WGA)通过在样本内扩增全基因组,克服了这个难题,可扩增获得足量的来源于同一样本的DNA用于后续分析。
对福尔马林固定、石蜡包埋的组织样本(FFPE)进行基因分型,可将组织的形态变化直接与特定基因组变异联系起来。但是,福尔马林固定会导致DNA pian段化,并与样本内的其他生物分子发生交联。此外,从FFPE样本中纯化得到的DNA量较少,只能用于少数几个分析。
REPLI-g FFPE Kit利用新型的DNA处理技术,将DNA段连接起来(参见REPLI-g FFPE principle)。然后通过经验证的REPLI-g技术对随机连接起来的DNA进行全基因组扩增。REPLI-g产品应与MDA以及独特的DNA聚合酶结合使用。REPLI-g DNA Polymerase凭借其活跃的进行性酶反应和单链置换反应,可很大程度上减少序列偏差和不均一位点的出现。该方法得到的结果比基于PCR的WGA方法更加可靠。新型的DNA处理技术可将MDA技术充分利用在FFPE组织样本中高度降解的DNA上。REPLI-g FFPE Kit在位点不变化的同时,实现对珍贵样本材料中DNA的扩增,产物可用于多种下游应用。
REPLI-g FFPE Kit (100)厂家直销
操作流程
操作流程
REPLI-g FFPE可使用FFPE组织样本直接进行DNA扩增,无需预先纯化DNA。裂解组织切片后,使用新型缓冲液和酶处理DNA,将片段化的DNA连接起来(参见REPLI-g FFPE procedure和High-molecular-weight ligated DNA)。反应后生成DNA长链,长链经REPLI-g技术扩增。扩增得到的DNA可即用于多数基因分型下游应用,无需进行纯化。
使用REPLI-g FFPE Kit扩增得到的DNA适用于real-time PCR(如使用QuantiFast Kits)和终点式PCR(如使用QIAGEN Fast Cycling PCR Kit)。PCR扩增子应比起始模板的平均片段长度短。还适用于微卫星分析(参见Reliable microsatellite analysis)和SNP基因分型(REPLI-g FFPE扩增得到的DNA可能不适用于需要限制性内切进行DNA标记的基因分型应用)。
应用
REPLI-g FFPE扩增的DNA适合以下应用:
Real-time PCR
终点式PCR
SNP基因分型
微卫星分析