牛分泌型免疫球蛋白 牛分泌型免疫球蛋白A试剂盒 
中英文说明书以人基质金属蛋白酶9试剂盒为例 
    人基质金属蛋白酶9（MMP-9）试剂盒使用说明书 
    本试剂盒仅供研究使用。 
    检测范围： 96T 
    45μg/L -1200μg/L 
    使用目的： 
    本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）含量。 
    实验原理 
    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平。用纯化的人基质金属蛋白酶-9（MMP-9）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入基质金属蛋白酶-9（MMP-9），再与HRP标记的基质金属蛋白酶-9（MMP-9）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白酶-9（MMP-9）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人基质金属蛋白酶-9（MMP-9）浓度。 
    试剂盒组成 
    130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶 
    2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（2400μg/L）0.5ml×1瓶 
    3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶 
    4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份 
    5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张 
    6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个 
    标本要求 
    1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
    2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 
    操作步骤 
    1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 
    1200μg/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 
    600μg/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 
    300μg/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 
    150μg/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 
    75μg/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 
    2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 
    3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 
    4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 
    5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 
    6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
    7.温育：操作同3。 
    8.洗涤：操作同5。 
    9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 
    10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 
    11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 
    Materials provided with the kit 
    1wash solution20ml×1bottle7Stopp Solution6ml×1 bottle 
    2HRP-Conjugate reagent6ml×1 bottle8Standard（2400μg/L）0.5ml×1 bottle 
    3Microelisa stripplate12well×8strips9Standard diluent1.5ml×1bottle 
    4Sample diluent6ml×1 bottle10Instruction1 
    5Chromogen Solution A6ml×1 bottle11Closure plate membrane2 
    6Chromogen Solution B6ml×1 bottle12Sealed bags1 
    Assay procedure 
    1.Dilute ａnd add sample:Dilute Original density Standard as follow table: 
    1200μg/L5 Standard150μl Original density Standard+150μl Standard diluent 
    600μg/L4 Standard150μl 5 Standard+150μl Standard diluent 
    300μg/L3 Standard150μl 4 Standard+150μl Standard diluent 
    150μg/L2 Standard150μl 3 Standard +150μl Standard diluent 
    75μg/L1 Standard150μl 2 Standard +150μl Standard diluent 
    2.add sample：Set blank wells separately （blank comparison wells don’t add sample ａnd HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same）. testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl （sample final dilution is 5-fold）, add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, ａnd Gently mix. 
    3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃. 
    4.Configurate liquid: 30-fold （or 20-fold） wash solution diluted 30-fold （or 20-fold） with distilled water ａnd reserve. 
    5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat. 
    6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well. 
    7.incubate：Operation with 3. 
    8.washing：Operation with 5. 
    9.color：Add Chromogen Solution A 50ul ａnd Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃ 
    10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction（the blue color change to yellow color）. 
    11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution ａnd within 15min. 
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