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人黑色素瘤细胞/人乳腺癌细胞
点击次数：111发布时间：2018/11/2 10:09:38
更新日期：2022/5/31 10:17:47
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
细胞介绍
MDA-MB-435S是一种纺锤形的细胞，1976年由其亲本(MDA-MB-435)中筛选得到。MDA-MB-435是从一名31岁的转移性乳腺导管腺癌女性患者胸水中分离得到的。当用荧光染料对微管蛋白进行染色时亲本细胞显现散布特征(II型)。 *近通过cDNA阵列研究表明，亲本(MDA-MB-435)可归入黑素瘤起源。
细胞特性
1） 来源：黑素细胞，黑素瘤 以前认为是乳腺; 乳房; 导管; 导管癌; 胸腺渗出液
2） 形态：上皮细胞样
3） 含量：>1x106 个/mL
4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：
（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；
（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞接受后的处理：
1） 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2） 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3） 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的完全培养基。
4） 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。
5） 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备L15培养基；优质胎牛血清，10%；添加0.01mg/ml胰岛素，0.01mg/ml谷胱甘肽；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，100%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注：次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为类；
1，细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2，4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
