说明

本试剂盒可用于从血液中分离完整而纯化的线粒体。

其制备物，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。

操作步骤

1. 血液处理：

血液要求：非肝素钠抗凝血，使用新鲜血液。对于陈旧血液，由于冻凝过程中冰晶已经对细胞核膜和线粒体膜产生损伤，所以线粒体得率会大大减少，并且完整性也会降低。

a. 对于无核红细胞全血（如哺乳动物处周血），取血约5ml（适当分成几管），加入3倍体积的红细胞裂解液（稀释后的工作液,下同），混匀，800 × g  5 min离心收集白细胞。加入1-2ml红细胞裂解液（稀释后的工作液），吹打重悬白细胞，合并于一管中，800 × g 5~10 min离心收集白细胞。此时如果白细胞有可见红色，可再次用少量(0.5ml)红细胞裂解液洗细一次。

b. 对于有核红细胞全血（如禽类全血），取约200-300ul全血，800 × g 5~10 min离心收集全细胞，用生理盐水或者PBS清洗两次，留沉淀去上清。清洗时请用去尖吸头吹打。

2. 在收集到的细胞中，加入1.0 mL冰预冷的白细胞裂解液重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨20~40次；

3. 匀浆物转移到离心管，4℃，1000× g 离心5 min；

4. 取上清，加入一新的离心管中，4℃，1000× g 再次离心5 min（一共两次离心，完整去核）。

5．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底；