酸性转化酶试剂盒使用说明！

测定意义：

蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶。根据*适 pH，Ivr分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。                           

AI(EC 3.2.1.26)主要存在于细胞液泡或自由空间中，*适 pH 为4.5~5.0（酸性），通过降解液泡中蔗糖，调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。

测定原理：

AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收增加速率与AI活性成正比。

自备用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存;

试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存;

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入25mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存;

试剂三：液体30mL×1瓶，4℃保存；

粗酶液提取：

称取约0.2g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；12000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。

测定步骤和加样表：

混匀， 37℃准确水浴30min后，煮沸10min左右（盖紧，以防水分散失），流水冷却后充分混匀（以保正浓度不变）

混匀，煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀， 510nm处记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定，ΔA=A测定-A对照。

AI活性计算：

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。

（1）按蛋白浓度计算：

单位的定义：37℃每mg组织蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

AI活性（U /mg）＝(ΔA +0.001) ÷0.0016÷反应时间（30min）÷蛋白浓度（mg/mL）=20.8×(ΔA +0.001) ÷蛋白浓度（mg/mL）

（2）按鲜重计算：

单位的定义：37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

AI活性（U /g）＝(ΔA +0.001) ÷0.0016÷反应时间（30min）÷样本鲜重（g/mL）=20.8×(ΔA +0.001) 样本鲜重（g/mL）

本产品仅供科研实验用，不做其它用途！

原创作者：南京信帆生物技术有限公司