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资料下载

γ-谷氨酰转肽酶试剂盒说明书

点击次数: 818发布时间:2011/3/7

  • 上 传 者: 南京信帆生物技术有限公司
  • 上传时间: 2018/3/13 9:51:44
  • 文件大小: 59KB
  • 文件类型: jpg
  • 所属分类: 操作维修手册
  • 下载次数: 368次
  • 查看次数: 818

资料简介: γ-谷氨酰转肽酶试剂盒说明书

产品内容:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体×1瓶,4℃保存。
试剂四:液体×1瓶,4℃保存。
工作液(在试剂二瓶中配制):临用前配制,把试剂三倒入试剂二瓶中,充分溶解(室温过低时可以40℃水浴促进溶解);然后把试剂四倒入试剂二瓶中,混匀后室温保存。

产品说明:
γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶,催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解,产生谷氨酸盐,在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸,生成对硝基苯胺,在405nm有特征光吸收;通过测定405nm光吸收增加速率,来计算γ-GT酶活性。

自备仪器和用品
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水

操作步骤:

一、粗酶液提取
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心15min,取上清,置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(10
4个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心15min,取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体:直接测定。

二、γ-GT 测定操作
1. 分光光度计预热 30min,调节波长到 405 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)水浴中预热 30min(保证无沉淀)。

3. 测定管:取 1mL 玻璃比色皿,依次加入 100μL 上清液,900μL 工作液,混匀后于 405nm 测定
10 s 和 70 s 时吸光度,记为 A1 和 A2。

注意事项:
1. 培养细胞中γ-GT活性测定时,细胞数目须在300万-500万之间,细胞中γ-GT的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞(防止因为蛋白质变性导致酶失活)。

2. 配置好的工作液2周内使用完毕

γ-谷氨酰转肽酶试剂盒说明书

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