组织细胞甘油含量酶法测定试剂盒
描述：甘油是甘油三酯的水解产物。与游离脂肪酸
一样，甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指
标，但检测更加方便。本试剂盒采用优化步骤，能
够检测实体组织、细胞中的甘油含量，线性范围为
10-1200µmol/L。
原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化为 3-
磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化
氢；在过氧化物酶作用下生色底物转化为苯醌亚
胺，其光密度值与甘油浓度成正比。
适用范围：测定实体组织、细胞中的甘油浓度。
组成 (105 次微板测定或 30 次 1 ml 比色杯测定)：
(1) 裂解液 50 ml
(2) R1 试剂 16 ml
(3) R2 试剂 4 ml
(4) 4 mmol/L 甘油标准品 1 ml
4 ºC，储存 3 月。
所需设备：酶标仪、生化分析仪或 721、722 型可
见光分光光度计。*佳工作波长 550nm，如无此波
长建议优先选用 570nm、次选 530、490nm。
一 组织细胞裂解
细胞(包括分化的脂肪细胞)裂解：
消化、离心收集细胞。或直接在培养皿内裂解。
通常6孔板单孔约2x106个细胞，75cm2瓶约1x107
细胞。按比例每 1~2 x 106细胞加 0.1ml 裂解液，
混匀，静置 10 分钟。
动物组织裂解：
切记要预先将新鲜组织剪切称重后再进行保存。
组织冻存后再进行解冻、剪切、称重可能会产生
严重的测量误差。离心管精确称重，加入组织块
后再称重，二者相减(即减量称重法)计算组织重
量(约 100mg)。强烈建议按比例每 1mg 组织加
10µl裂解液以减少样品间蛋白和脂质含量变异而
产生的误差。（注意；裂解液用量在 1ml 或更多
可保证有效的裂解与脂质提取）。用电动高速匀浆
器或手动玻璃匀浆器破碎组织。（不推荐超声方
法，因其不能完全和均匀破碎。应根据预实验调
整初始的组织细胞加入量），而后，静置 10 分钟。
二. 裂解液处理：
1. 取适量上清液转移到 1.5ml 离心管中，进行步骤
2 的操作。余下的裂解液可用 BCA 法蛋白定量
试剂盒(#P1511)进行蛋白定量或－20ºC 储存。
2.
70ºC 加热 10 分钟灭活脂肪酶，可能出现絮状沉
淀。
3.
室温 5000rpm 离心 5 分钟，上层清液即可用于
酶学测定。
三 工作溶液配制：按 4:1 比例，取 4 ml 试剂 R1 与
1 ml 试剂 R2 混合即可，立即使用或 4ºC 保存<1 天，
变色弃去。（注意：谨防来源不明但容易发生的甘
油污染，可来自操作者本人或标准品液体微粒溅射
等。）
四 标准品稀释：用蒸馏水、生理盐水或与样品缓
冲液一致的液体，将 4 mM 甘油标准品倍比稀释为
1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125
µmol/L，通常取其中 4~6 管即可，注意设置 0 浓度
对照反应管。
五 甘油测定
1. 参见下表加样。待测样品体积 10µl，多加可能
会抑制反应。
2. 37ºC 或 25ºC 反应 10 分钟。反应平衡后颜色在
60 分钟内稳定。
3. 先用蒸馏水+工作液的空白管调零，然后测定各
管 OD 值。
4. 绘制标准曲线并计算甘油浓度。
附 Excel 作图步骤：各标准管 OD 值为 y 轴，标
准品浓度为 x 轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击
做图向导，选择-散点图-，点击-完成-。(2)鼠
标右键点图上的某一点，点击-添加趋势线-，点
击-选项-，点击-显示公式-和-R2 值-。
5. 以每 mg 蛋白浓度或细胞数校正甘油含量。
说明：
1.维生素C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、
二硫苏糖醇、巯基乙醇、高浓度EDTA干扰测试。
2.红细胞糖酵解时合成磷酸甘油影响测定。
参考文献：
1. Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
2. Barham D ａnd Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145
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