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南京信帆生物技术有限公司 主营产品:elisa试剂盒,进口elisa试剂盒,elisa kit,进口血清,进口试剂,明胶酶谱法检测试剂盒,大鼠elisa检测试剂盒,人elisa检测试剂盒

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公司新闻

信帆生物提供RT-PCR实验代测服务

点击次数:891发布时间:2017/3/21

 信帆生物提供RT-PCR实验代测服务


逆转录PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。


由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”,由依赖RNA的DNA聚合酶(逆转录酶)来完成。随后,DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成,随每个循环倍增,即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶H降解,留下互补DNA。


RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术,可以检测很低拷贝数的RNA。RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断,并且可以用于定量监测某种RNA的含量。检测基因表达的方法,参见Northern Blot法。


RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录,要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种,即鸟类成髓细胞性白细胞病毒(avian myeloblastosis virus,AMV)反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒(moloney murine leukemia virus,MMLV)反转录酶。


在完成逆转录过程之后,通过PCR进行定量分析的时候,随着技术的发展,real-time PCR(实时荧光PCR)或ddPCR(数字PCR)技术也被用来做定量分析,它们比普通PCR进行定量分析时灵敏度更高,定量更精确。


Real -Time PCR,即实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法,它是在PCR反应体系中加入荧光物质,并通过Real -Time PCR检测系统对PCR反应进程中的荧光信号强度进行实时监测,*终对实验数据进行分析处理的方法。Real -Time PCR自1996年由美国Applied Biosystems公司推出以来,广泛应用于生物研究的各个领域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探针法两种。


信帆生物提供RT-PCR实验代测服务
 
PCR实验代测,荧光定量PCR代测服主要仪器及耗材
旋涡振荡器 :上海青浦泸西仪器厂产品
手握式电动匀浆机:德国FLUKO 公司产品
低温冷冻离心机:Sigma(3K15)公司产品
Real-time检测仪:ABI (ABI-7300)公司产品
超纯水分离系统:美国LABCONCO公司
离心管及10μL、200μL、1000μL枪头等常规耗材均为国产;RNA提取过程中所需的离心管、枪头等耗材经过0.1%的DEPC水浸泡过一夜,121℃灭菌30min,烘干后备用。
 
PCR实验代测,荧光定量PCR代测服实验室试剂的操作
1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压灭菌。
3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。
4)所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。
5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。
6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。
7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。

信帆生物提供RT-PCR实验代测服务


本程序适用于自动PCR操作,可适用于大多数情况,所用酶是不含核酸外切酶活性的热稳定聚合酶,如Taq聚合酶等。 
引物(各50pmol) 0.2mmol/L dNTPs(必须使用高质量的dNTPs,这一点非常重要。dNTPs经反复化冻后会发生降解,因此应分成小份保存。应注意混合物中四种dNTP的量要相等) 模板DNA:约0.05~1mg基因组DNA或0.002~0.02mg质粒DNA Taq DNA聚合酶(Perkin Elmer, Norwalk, Connecticut) 10×PCR缓冲液(500mmol/L KCl,15mmol /L MgCl2,100mmol/L Tris·HCl,pH 8.3) 矿物油 
电泳所需试剂 
仪器设备】 
PCR扩增仪 
电泳装置 
微量离心机
微量移液器(1~20ml和20~200ml) 
0.5ml Eppendorf 管 
紫外线观察装置及照相设备


信帆生物提供RT-PCR实验代测服务

信帆生物公司主要代理产品:

elisa试剂盒:进口elisa试剂盒,国产elisa试剂盒,人elisa试剂盒,大鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒等。

培养基:微生物培养基,显色培养基,BD培养基,gibco培养基等。

血清:胎牛血清,人血清,动物血清,NQBB,Hyclone,Gbico原装血清 。

生物试剂:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等进口试剂。

标准品对照品:进口对照品,进口对照药材,进口标准品.

抗体:一抗,二抗,流式抗体等。

放免试剂盒:进口放免试剂盒,国产放免试剂盒,进口美国凤凰等知名品牌放免试剂盒。

实验室代测服务:放免代测,WB实验,免疫组化代测,荧光定量PCR代测,病理细胞染色代测,生化实验代测等。



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