革兰阳性菌裂解缓冲液重要的成分—蛋白酶抑止剂

细菌细胞中革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌由于细胞壁结构不同,裂解时也要考虑不同结构的Lysis Buffer。所以在采购Lysis Buffer产品时,一定要进行选择。Lysis Buffer也有它的共性,如缓冲能力、破坏细胞壁、细胞膜的裂解能力等。

Lysis Buffer是生物学实验中经常使用的缓冲液,它是一个很大很宽泛的概念,它并不特指某种固定的溶液配方,而是要根据不同的实验目的有针对性的选择和调整。

裂解都用到缓冲剂,只要在缓冲溶液pH范围内,BPS、Tris都可以作为缓冲剂,氯化钠的浓度直接影响到蛋白与蛋白之间的相互作用,一般浓度在0-1M之间。一般而言,氯化钠浓度越高,越不利于蛋白之间结合。EDTA浓度一般在0-5mM,也是缓冲剂的主要成分,也是酶活性抑止剂,量大可使酶失活保护蛋白。表面活性剂是非常值得关注的,离子性表面活性剂的裂解效果zui强,两性非离子性表面活性剂裂解效果次之。一般离子性表面活性剂的用量在0.01%-0.05%之间,两性表面活性剂用量在0-10mM之间,非离子性表面活性剂用量在0.1%-0.2%之间。在裂解液中常用到表面活性剂有Tritonx-100、NP-40、脱氧胆酸钠、肌氨酸钠、SDS、CTAB等。

裂解液中还有一个很重要的成分——蛋白酶抑止剂,其作用是阻止蛋白酶对细胞组织的消化作用,使组织细胞受到完全的保护。不同的蛋白酶需要不同的抑止剂,对其选择相当重要,只有正确选择,才能有效抑止蛋白的降解,使其维持原有的蛋白相互作用。    常用的蛋白酶抑止剂有多聚磷酸钠,钒酸钠、PMSF、DTT、巯基乙醇、Pepstatin(胃蛋白酶抑止剂)、Lenpeptin(亮抑止肽)、Aprotinin(抑蛋白酶肽)等。有些抑止剂稳定性很差,一般不放入裂解储存液中,在裂解前临时加入。

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