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禽白血病抗原检测试剂盒原来可以这样检测
点击次数：784发布时间：2020/7/29
禽白血病抗原检测试剂盒原来可以这样检测
ALV可引起不同的肿瘤性疾病，包括淋巴白血病、成红细胞瘤、成髓细胞瘤等。p27是ALV病毒群（A，B，C，D，E和J亚群）的主要gs抗原，高度保守，因而p27抗原的检测是ALV抗原检测的基础。
本试剂用于检测p27，推荐采用稀蛋清和泄殖腔拭子样品进行检测，虽然血清在ALV抗原的检测中是有效的，但由于潜在内源性病毒序列的干扰，因而在外源性病毒的检测中不推荐采用血清样品。在p27抗体包被96孔反应板中，样品中的p27抗原与包被的抗体可以形成复合物。洗掉未结合的物质后，再加入辣根过氧化物酶标记的抗p27抗体，后者与结合在孔中的p27结合。随后，洗掉未结合的标记物，加入底物液，生成的颜色与检测样品中的p27含量有关。由于蛋清较粘稠，本说明书介绍了改进的样品处理/洗涤方法。
【产品用途】
禽白血病抗原检测试剂盒(ALV Ag)是用于检测鸡血清、泄殖腔拭子和蛋清样品中的禽白血病病毒(ALV)p27抗原的酶联免疫检测试剂盒。
【用法与判定】 按以下步骤进行：
1、需要自备的器材
1.1精密单道移液器和多道移液器
1.2一次性吸头，
1.3 96孔酶标仪
1.4样品稀释试管，
1.5蒸馏水或去离子水，
1.6洗涤溶液滴加和吸取装置（洗板机）
操作步骤中列出的试剂体积要求移液器误差不超过±5%。
2、样品的准备
蛋清—收集稀蛋清，无需稀释直接加到ELISA反应板中。冻融样品可降低其粘稠度。
泄殖腔拭子—将泄殖腔拭子加到1mL培养液中或样品稀释液中冷冻。检测前，将样品恢复至18-26℃，让杂质沉淀下来。吸取100 μL上清，加到ELISA反应板中。
血清—用于p27的常规检测，无需稀释血清样品直接加到反应板中。因为内源性病毒的干扰作用，不推荐使用血清样本进行外源病毒p27的检测。
3、操作步骤 （适用于蛋清以外的样品）
使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀，所有试剂应恢复至室温。
3.1 取出抗体包被板，记录样品的位置。
3.2 在适当的两孔中分别加入100μL未稀释的阴性对照。
3.3 在适当的两孔中分别加入100μL未稀释的阳性对照。
3.4 在剩余的孔内分别加入100μL被检样品。样品既可采用双孔检测也可采用单孔检测。样品无需稀释用于检测。
3.5. 盖好反应板盖板，在18-26℃条件下孵育60分钟（±5分钟）。
3.6 用大约350μL蒸馏水或去离子水洗涤板孔，重复3－5次。*后一次洗板后将液体拍干。
3.7 每孔加入100μL酶标抗体。
3.8 盖好反应板盖板，在18-26℃条件下孵育60分钟（±5分钟）。
3.9 重复步骤3.6。
3.10. 每孔加入100μLTMB底物液。
3.11 盖好反应板盖板，在18-26℃条件下孵育15分钟（±1分钟）。
3.12每孔加入100μL终止液终止反应。
3.13.测量并且记录样品和对照于650nm波长的吸光值A(650)。
蛋清样品洗涤方法
稀蛋清样品有时很难用上述标准的方法，用水完全从反应板上洗掉。本试剂盒准备了20倍浓缩洗涤液，用于蛋清样品的洗涤。
洗涤溶液的制备
20倍浓缩洗涤液应恢复至18-26℃并使沉淀的盐溶解混匀。使用前，用蒸馏水或去离子水对蛋清浓缩洗涤液应进行20倍稀释（例如：每板用20mL浓缩洗涤液加入380mL水中）。蛋清样品洗涤步骤
除了步骤3.6和步骤3.9的洗涤方法外，蛋清样品的检测步骤与上述步骤相同。吸出对照和被检蛋清样品孔中的液体，每孔加入大约350μL上述制备的洗涤溶液，浸泡两分钟，吸出孔中液体。再重复4次，但每次不用再浸泡2分钟。
4、结果判定
阳性对照的平均值减去阴性对照的平均值（PC`x-NC`x）必须大于0.200，阴性对照平均值必须小于或等于0.150，试验方能有效。被检样品中是否含有p27抗原与其A(650)和阳性对照的平均值的比值有关。阳性对照已经标准化处理，代表显著的抗原水平(大约10ng/mL)。被检样品抗原的相对含量通过计算样品与阳性对照比值（S/P）来确定。如果S/P小于等于0.20，样品为阴性；如果S/P大于0.20，说明样品中存在p27抗原。
【注意事项】
1.认真处理所有的ALV材料以免ALV的传播，阳性对照可能成为ALV的传染源，尽管阳性对照已经过化学处理灭活，但不能认为其完全灭活。
2.试剂盒的一些成分含有叠氮钠作为防腐剂。
3.处理各组分要按照当地、区域以及国家规定进行。
4.不要将TMB暴露于强光和任何氧化剂下，所有的试剂应在2－8℃储存，所有的废弃液应在丢弃前合理处理以免污染。
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