影响实验重复性的关键原因-信帆生物


1试剂的新鲜度

 

这是决定实验结果很重要的因素。食品过期了，人吃了尚且会生病。食品的保质期在包装袋上可以找到，但对于我们实验用的试剂，我们却很少能够清楚知道保鲜期。你提取了DNA质粒用来作为PCR反应的模板，这次实验用了一部分，其余的冷冻在-20冰箱里了。下一次再进行PCR反应时，你准备融化这些DNA继续当作模板。但要知道冷冻融化的过程很可能已经破坏DNA的结构。

 

2仪器

 

两台PCR仪，设置的条件一致，*终实验结果不一定一样。尽管PCR仪都能进行PCR反应，但两台仪器可能生产厂家不一样？生产厂家一样，可能生产批次一样。温度设置是60度，一台仪器的实际温度可能是60.3度，一台仪器的实际温度可能是59.8度。尽管差距很小，但这可能就是影响你实验的重要条件。

 

3试剂生产厂家

 

很多厂家都会生产同一种药品，但由于不同厂家的质检标准不一样或者生产方式不一样，药品可能并不相同。同样是牛血清蛋白，为什么有的厂家生产的可以室温保存，有的却需要4度放置。同样的Pfu DNA聚合酶，你用这家的进行PCR反应没有结果，另一家的可能就会成功。因此，在你准备更换另一个厂家的产品的时候，一定要保证新的产品与你之前使用的尽可能相同。

 

4操作样品数量

 

引入误差*常见的因素就是一次操作样品过多。操作样品过多，很难保证所有样品处于同样的实验条件。比如，你需要提取30个质粒，即便你使用多孔道移液器也不能同时在所有EP管内同时加入P1， P2，P3。因此与其一次操作很多样品，导致实验失败，不如多花些时间，分批做，保证成功。

 

5其他变量

 

温度，浓度，体积，离心速度，离心时间等都有可能影响


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