植物总蛋白提取试剂原来操作这么简单


描述：植物组织成分复杂含有较多的酚类物质、多糖、色素、次生代谢产物， 这使得植物蛋白质的分离提取变得困难。本试剂适用于多种植物根、茎、叶及果实等的新鲜或冻存组织，能够快速有效地提取植物中的可溶性和疏水性蛋白成分，有效去除组织中所含的多糖、脂质、次生代谢产物等干扰蛋白研究的成分，同时能够使提取的蛋白质处于*佳的活性状态和检测状态，适用于酶学活性测定，单向、双向蛋白电泳、Western Blot 和免疫共沉淀等实验。

 

规格： 50ml  100ml

 

储存：4℃避光保存，12个月有效

 

操作步骤：

 

1.         组织匀浆，必须充分匀浆，这一步非常关键。

 

（1）冻存组织匀浆：预先将研钵至于-20℃或-70℃冰箱内预冷。取液氮冻存的植物组织，放入冰冻的研钵内研磨成粉末，注意使组织处于冰冻状态，如组织颜色加深或变黑通常表明组织已经融化。将研磨好的组织转移到新管，按每 200mg 植物组织加 0.5ml 比例加入提取试剂，混匀后冰上放置20 分钟，期间可数次颠倒混匀，以便蛋白溶解。

 

（2）新鲜组织匀浆：取新鲜组织放入研钵中，按每 200mg 植物组织加 0.5ml 比例加入提取试剂，充分研磨至匀浆液中看不到大的块状或者片状组织，保证组织研磨破碎。转移至离心管内，冰上放置20 分钟。

 

2.         离心：12000g 离心 15 分钟，将上清液转移至新的离心管中，直接使用或-70 ℃储存。

 

3.         后续处理：

 

（1）如果进行酶学测定，直接取蛋白上清液加入反应。

 

（2）沉淀蛋白；首先估计制备的蛋白上清液体积。方法一：加 1/3体积 30%三氯醋酸水溶液；方法二：加入 6-10倍体积的 1:1混合的丙酮/乙醇，然后-20℃沉淀 1 小时或过夜。4 ℃，5000g 离心 10分钟，弃上清，空气略干沉淀，用适量的 1*SDS 上样缓冲液溶解沉淀，95℃变性 5 分钟，上样电泳。适于进行 SDS-PAGE、Western Blot、双向电泳等。

 

（3）直接电泳：需加入 4*SDS 上样缓冲液。上清如有少量色素一般不会影响蛋白电泳。

 

（4）免疫共沉淀：用蒸馏水等比例稀释提取的蛋白上清，进行免疫共沉淀。

 

（5）蛋白定量：用 BCA 蛋白定量试剂盒进行定量