使用方法：

1. 装柱

1.1 根据分离目标性质配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。

2

1.2 将凝胶抽干，并用蒸馏水洗涤2 次去除保存的乙醇，用初始缓冲液（按凝胶:缓冲液=3:1 的比例）配成匀浆并脱气。

1.3 将层析柱垂直固定，底端用水或缓冲液润湿并保持一段液位。

1.4 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，使凝胶在柱内自由沉降。

1.5 连结好柱子顶端活动柱头，打开蠕动泵，让缓冲液用使用时操作流速流过5 柱体积，再使用1.5 倍的操作流速流过5 柱体积，调节适配柱头，使其尽量贴近胶面，*后用2-3 倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

注意：（1）所有操作过程不能引入气泡，保证装胶的均匀度。（3）如无条件做1.2，填料层有气泡，可进行2 次装柱，去除保存的乙醇和气泡。（4）乙醇等试剂配制的溶液需要脱气。

2. 平衡

将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱，观察检测器的变化，直到电导、pH 等参数不变。

3. 上样

切换转换阀进行上样，上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择，也可进行线性实验找到*佳上样量；样品的预处理：除盐，置换缓冲液，澄清过滤（0.45、0.22μm）等。

4. 冲洗

用2-3 个柱体积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱，观察检测器的变化，直到电导、pH 等参数不变，此时未交换的组分被清洗出去。

5. 洗脱

离子交换柱的洗脱可用恒定洗脱、梯度洗脱或者阶跃洗脱，一般推荐增大盐浓度的梯度洗脱进行。

6. 再生

用高盐浓度的缓冲液（含1-2mol/L NaCl）按操作流速冲洗3-5 个柱体积，接着用平衡液洗到平衡3-5 个柱体积。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7. 在位清洗(CIP)

对于强结合蛋白质或脂类物质，可采用以下流程进行在位清洗：1mol/L NaOH 洗2个柱体积，8mol/L 尿素洗2 个柱体积， 30%异丙醇洗2 个柱体积，平衡缓冲液洗2 个柱体积。在位清洗可有效去除介质上的杂质，反向效果更佳。如需要去除内毒素热原，可以在50cm/h 速度下，1mol/L NaOH 清洗1-2h，再用无热原的1M NaCl 溶液置换(OH-置换为Cl-)。