DNS 试剂(NY/T 法)使用步骤说明

产品简介：

植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质形状，常以糖含量作为重要指标，单糖和某些寡糖(如麦芽糖)含有游离的醛基或酮基，具有还原性，属于还原糖；多糖和蔗糖等属于非还原糖，可以利用多糖能被酸水解为单糖的特性，通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。

DNS 试剂(NY/T 法)由氢氧化钠、3,5-二硝基水杨酸、酒石酸钾钠、酚等配制而成，DNS 浓度为 6.3g/L，是植物总糖和还原糖检测(硝基水杨酸法)的成分，其检测原理是还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水杨酸被还原为棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程度呈一定比例关系，在540nm处测定棕红色物质的吸光度，该吸光度值与还原糖含量呈线性关系，利用比色法和标准曲线测得样品中的还原糖和总糖的含量。DNS 试剂也常用果胶酶、淀粉酶、纤维素酶、木聚糖酶等的活性测定。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、蒸馏水、盐酸溶液、氢氧化钠溶液

2、剪刀、匀浆器或研钵、50ml 离心管、离心机、水浴锅或恒温箱、分光光度计、比色皿

操作步骤(仅供参考)：

1、还原糖的提取：①称取植物样品 0.5~3g，剪碎，加入蒸馏水约 3ml 匀浆，转移至烧杯或三角瓶中，用12ml 蒸馏水冲洗研磨器 2~3 次，洗出液也转移至该容器。②50℃水浴 30min，并不时搅拌，以便还原糖彻底浸出。③将沉淀和浸出液转移至 50ml 离心管，4000g 离心 5min。④留取上清液，向沉淀中加入 20ml 蒸馏水，混匀，再次 4000g 离心5min。⑤留取上清液，将 2 次获得的上清液合并，用蒸馏水定容至 100ml(提取液)，混匀，作为还原糖待测液。

2、总糖的水解和提取：编号名称TC0030 TC0030 StorageDNS 试剂(NY/T 法) 100ml 500ml 室温避光使用说明书 1 份Beijing Leagene Biotechnology Co., Ltd.400-0000-455 www.leagene.com①称取植物样品 0.5~3g，剪碎，加入蒸馏水约 3ml 匀浆，转移至烧杯或三角瓶中，用12ml 蒸馏水冲洗研磨器 2~3 次，洗出液也转移至该容器。②向容器中加入 10ml 6M 盐酸溶液，搅拌均匀，煮沸 30min，并不时搅拌。③取 2 滴滴加于载玻片上，滴加 1 滴显色液，检查水解是否完全，如已经水解完全则不显示蓝色。④水解完毕后，冷却至室温，加入 6M 氢氧化钠溶液，使溶液 pH 至7.4 左右，用蒸馏水定容至 100ml，混匀，4000g 离心 5min 或过滤，获得上清或滤液。⑤取上清或滤液 10ml，用蒸馏水定容至 100ml，成稀释 10 倍的总糖水解液(提取液)，取 1ml 总糖水解液，测定其还原糖的含量。

3、制作葡萄糖标准曲线：取干净离心管或试管，按下表进行操作，以0 号调零，检测540nm处吸光度，以吸光度为纵坐标，各标准浓度(mg/ml)为横坐标作图得标准曲线。

 4、还原糖测定：取制备好的还原糖提取液或者总糖水解液 1ml，分别加入DNS 试剂2ml，其余操作同标准曲线的操作，540nm 处测定各管的吸光度。

 计算：

还原糖的百分含量：

还原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100

总糖的百分含量：

总糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9

式中：C=从标准曲线查的糖量(mg)

VT=提取液的体积(ml)

m=植物样品的质量(mg)

Vs=测定时用的样品体积(ml)

注意事项：

1、 该试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降，尽量避光保存。

2、 稀释盐酸和氢氧化钠溶液时，应小心操作，避免伤人。