灭菌与消毒

灭菌是应用物理的或化学的方法杀死物品上或环境中的所有微生物。灭菌后的物品处于无菌状态。

消毒是应用物理的或化学的方法杀死物体上绝大部分微生物（特别是病原微生物）物品经消毒处理后，虽仍有少数微生物未被杀死，但已不致引起有害作用，故消毒实质上是局部灭菌。

在微生物实验、生产、工作中，需要进行纯培养，要求不能有任何杂菌，因此，对所用器皿、培养基均需要进行严格的灭菌，工作场所也应消毒，才能保证工作顺利进行。

我们常用的灭菌、消毒方法有：高温灭菌法、紫外线灭菌、化学药剂消毒灭菌。

（一） 高温灭菌法

  原理：高温可使细胞原生质变性而失去生命力。

1． 火焰灭菌法：直接用火焰烧灼的灭菌。此法迅速彻底，对于接种环，接种针等金属用具，可直接在酒精灯外焰上烧至红热进行灭菌，在接种的过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰达到灭菌的目的。沾污了病菌的残渣、废纸等用火烧掉，都属于火焰灭菌法。

2． 干热灭菌法：利用干燥热空气杀灭细菌，常用于玻璃器皿（如吸管、培养皿等）、金属用具的灭菌，一般地采用150℃维持2h或160℃维持1h即可，盛装玻璃器皿的铜筒，筒加热时即将两孔对齐，灭菌结束取出时，将两孔错开，使铜桶密闭。

3． 煮沸灭菌法：严格讲此法算消毒作用，常用煮沸灭菌法来处理污染了菌类的瓶子、用具等将其煮沸30min左右杀死大部分菌后才能洗刷。

4． 高压蒸汽灭菌：其在密闭的高压蒸汽灭菌器中进行，原理是在密闭的环境下，蒸汽的温度随压力的增加而提高，压力越大，温度越高，从而达到灭菌的目的。

我们实验室目前用的是手提式灭菌器，其使用方法及注意事项为：

① 在灭菌锅内加入足量的蒸馏水，将灭菌的物品疏松的放入锅内，切不可挤的太满，以免阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果，然后加盖并按对角拧紧螺栓，打开放气阀；

② 接通电源加热，待锅内的水沸腾有大量的蒸汽冲出时，保持3-5min，使灭菌锅内冷空气完全排出，关闭放气阀，此后压力逐渐增高至所需压力（或温度）时开始记时，维持时间根据灭菌物品的要求确定。

③ 灭菌结束后，关闭电源，让压力自然下降，切不可突然放气降压，以免引起培养基、无菌水暴沸，污染棉塞，待压力降至“0”后，方可打开灭菌锅盖，快速取出灭菌物品。

（二） 紫外线灭菌

紫外线对微生物有强烈致死作用，波长在260nm左右的紫外线杀菌力蕞强。杀菌机制是短波的紫外线引起细胞蛋白质和核酸发生光化学反应。紫外线穿透力很弱，普通玻璃、薄纸、水层等均能阻止其透过，故紫外线只限于物体表面或接种室的空气灭菌，接种室安装一支30W灯管，约可照射9M³空间，照射前可喷洒石炭酸、煤酚皂溶液等化学消毒剂以加强灭菌效果，一般照射30-60min即可。

紫外线对眼粘膜及视神经有损伤作用，对皮肤有刺激作用，所以不能在紫外线灯下工作，必要时须穿防护衣帽，并戴有色眼镜。