产品名称：铁离子比色法检测试剂盒

 

产品货号：XFP10451

 

产品规格：100T

 

储存条件：4℃保存

 

细胞铁离子检测试剂盒可用于培养细胞中铁离子定量检测。本试剂盒采用亚铁嗪比色法可以定量细胞铁离子，线性范围5~300uM。产品包括标准品和空白对照，本试剂盒可进行100个样品的检测。铁是人体必需的元素，对人体的新陈代谢和身体健康具有重要作用，血液中铁的含量不足，就会造成缺铁性贫血。铁存在于人体所有的细胞内，各组织、器官包括各内分泌腺都含有铁。肝脏、脾脏和肺组织内含量较为丰富。成人体内含铁3～5克，大部分都以蛋白质复合物形式存在，极少部分以离子的形态存在。

 

检测原理：

 

铁与蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁， 并与亚铁嗪生成紫红色化合物，在 540-580nm 处可比色测定。

 

 

实验步骤：

 

1.  样品准备（以24孔板为例）：

 

将含铁元素DMEM培养过的细胞用冷的PBS 2ml洗两遍，将PBS吸弃（若不马上检测可将其冻存于-20℃）。200ul/孔裂解液裂解细胞，置于摇床裂解2h。

 

2. 标准品的稀释：用试剂盒提供的稀释用液将3mM 的标准品母液稀释为：300 uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀释并设置0浓度对照反应管。

 

3.  将缓冲液与4.5%高锰-酸钾溶液按1:1混匀，称为混液A。 注意：用户自备4.5%高锰-酸钾溶液 5ml。

 

4.  参考下表使用1.5ml离心管，设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中的铁元素含量过高，用裂解液适当稀释后再进行测定。

 

5.  混匀，60℃ 孵育1h。

 

6.  冷却至室温，将管盖与管壁上的液滴离心入管底。

 

7.  加入30ul 铁离子检测剂，混匀，室温孵育，30min。

 

8. 取200ul 于96孔板，在550nm测定吸光度。如果不能测定550nm，也可以在540nm~580nm范围内检测。

 

9.  绘制标准曲线并计算铁离子浓度。