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RT-PCR实验代测
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详细内容
Real -Time PCR,即实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法,它是在PCR反应体系中加入荧光物质,并通过Real -Time PCR检测系统对PCR反应进程中的荧光信号强度进行实时监测,*终对实验数据进行分析处理的方法。Real -Time PCR自1996年由美国Applied Biosystems公司推出以来,广泛应用于生物研究的各个领域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探针法两种。
RT-PCR实验代测
PCR实验代测,荧光定量PCR代测服主要仪器及耗材
旋涡振荡器 :上海青浦泸西仪器厂产品
手握式电动匀浆机:德国FLUKO 公司产品
低温冷冻离心机:Sigma(3K15)公司产品
Real-time检测仪:ABI (ABI-7300)公司产品
超纯水分离系统:美国LABCONCO公司
离心管及10μL、200μL、1000μL枪头等常规耗材均为国产;RNA提取过程中所需的离心管、枪头等耗材经过0.1%的DEPC水浸泡过一夜,121℃灭菌30min,烘干后备用。
PCR实验代测,荧光定量PCR代测服实验室试剂的操作
1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压灭菌。
3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。
4)所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。
5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。
6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。
7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
RT-PCR实验代测
本程序适用于自动PCR操作,可适用于大多数情况,所用酶是不含核酸外切酶活性的热稳定聚合酶,如Taq聚合酶等。
引物(各50pmol) 0.2mmol/L dNTPs(必须使用高质量的dNTPs,这一点非常重要。dNTPs经反复化冻后会发生降解,因此应分成小份保存。应注意混合物中四种dNTP的量要相等) 模板DNA:约0.05~1mg基因组DNA或0.002~0.02mg质粒DNA Taq DNA聚合酶(Perkin Elmer, Norwalk, Connecticut) 10×PCR缓冲液(500mmol/L KCl,15mmol /L MgCl2,100mmol/L Tris·HCl,pH 8.3) 矿物油
电泳所需试剂
【仪器设备】
PCR扩增仪
电泳装置
微量离心机
微量移液器(1~20ml和20~200ml)
0.5ml Eppendorf 管
紫外线观察装置及照相设备
PCR代测,PCR技术服务,荧光定量PCR
信帆生物公司主要代理产品:
elisa试剂盒:进口elisa试剂盒,国产elisa试剂盒,人elisa试剂盒,大鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒等。
培养基:微生物培养基,显色培养基,BD培养基,gibco培养基等。
血清:胎牛血清,人血清,动物血清,NQBB,Hyclone,Gbico原装血清 。
生物试剂:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等进口试剂。
标准品对照品:进口对照品,进口对照药材,进口标准品.
抗体:一抗,二抗,流式抗体等。
放免试剂盒:进口放免试剂盒,国产放免试剂盒,进口美国凤凰等知名品牌放免试剂盒。
实验室代测服务:放免代测,WB实验,免疫组化代测,荧光定量PCR代测,病理细胞染色代测,生化实验代测等。
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