免疫组化结果阴性的原因分析

1. 抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误；

2. 抗原修复不全，换修复液或加强修复；

3. 组织切片本身这种抗原含量低，设阳性对照片；

4. 血清封闭时间过长；DAB 孵育时间过短；

6. 细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。

非特异性染色的原因（着色一片黄/背景深）

1. 抗体孵育时间过长，抗体浓度；

2. 多抗易出现非特异性，可选择单抗；

3. 内源性过氧化物酶和生物素灭活不够；

4. 非特异性组分与抗体结合，延长血清封闭时间；

5. DAB 孵育时间过长或浓度过高；

6. PBS 冲洗不充分，残留抗体结果增强着色；

7. 标本染色过程中经常出现干片；

8. 脱蜡不充分；

9. 二抗与标本的内源性组织蛋白有交叉反应。

染色弱阳性

1. 固定方式不当或固定时温度过高，影响到抗原的数量和质量；

2. 不适当的抗原修复方式，抗原决定簇暴露不足；

3. 抗体的稀释度是否过高或者孵育的温度/时间不足；

4. 孵育抗体切片上遗留了过多的冲洗液；

5. 孵育时切片未放置水平，导致抗体孵育不均匀。

信号定位与预测不符的原因

1. 组织固定不及时，抗原扩散移位；

2. 抗体选择错误；

3. 膜蛋白核质染色：抗原修复过长，导致细胞膜破坏，膜蛋白转移。

原创作者：南京亿迅生物科技有限公司