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马亨德拉病(HENDRA)elisa试剂盒标本要求及操作方法!
点击次数:607发布时间:2018/8/9
马亨德拉病(HENDRA)elisa试剂盒标本要求及操作方法!
亨德拉病毒(HendraVirus,HeV),亨德拉病毒旧称马科麻疹病毒(EquineMorbillivirus),后重新被命名为亨德拉病毒。亨德拉病毒是一种新的人畜共患病毒性疾病病毒,于1994年~在澳大利亚昆士兰州布里斯班郊区的亨德拉首次被发现,能引起严重的呼吸道疾病这种病毒造成的疾病的典型特征是严重的呼吸困难和高死亡率,还表现为人接触性感染。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中马亨德拉病(HENDRA)表达。用纯化的马亨德拉病(HENDRA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中亨德拉病(HENDRA)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的亨德拉病(HENDRA)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中马亨德拉病(HENDRA)的存在与否。
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
马亨德拉病(HENDRA)elisa试剂盒标本要求及操作方法!
1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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马亨德拉病(HENDRA)elisa试剂盒标本要求及操作方法!