乳铁蛋白正确的分离和检测的方法！

乳铁蛋白(lactoferrin，LF)是乳汁中一种重要的非血红素铁结合糖蛋白，中性粒细胞颗粒中具有杀菌活性的单体糖蛋白。其分子量为80 kDa，主要由上皮细胞表达和分泌。

1939年Sorensen等人在分离乳清蛋白时得到一种红色蛋白，Polis等人在分离Lp时也得到部分纯化的红色蛋白，但至1959年Groves用色谱得到纯的红色物质后，才确认这种红色物质是一种与铁结合的糖蛋白，称之为乳铁蛋白。

乳铁蛋白不仅参与铁的转运，而且具有广谱抗菌、抗氧化、抗癌、调节免疫系统等强大生物功能，被认为是一种新型抗菌、抗癌药物和极具开发潜力的食品和饲料添加剂。

乳铁蛋白是由科学家MONTREUIJ和JOHANSONB于1960年在母乳中发现的，随后BAGGIN等科学家在一些生物体的体液和各种细胞中发现了这种蛋白质并开始了大量研究。

研究表明，乳铁蛋白是动物初乳中的天然蛋白质，是一种多功能蛋白质。研究表明，乳铁蛋白肽具有广泛的生物学活性，包括广谱抗菌作用、消炎、抑制肿瘤细胞生长及调节机体免疫反应等，被认为是一种新型抗菌、抗癌药物和极具开发潜力的食品、化妆品添加剂，市场前景广阔。

2012年3月30日，中国《食品安全国家标准——食品营养强化剂使用标准》将乳铁蛋白列入GB14880-2012，认定为食品营养强化剂，乳铁蛋白也是母乳中含有的特有的成份，可以抑制病毒和有害菌，有提高婴儿免疫力的作用。

目前报道的Lf分离方法很多，主要有色谱法（吸附色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、固定化单系抗体法等）和超滤法。

色谱法的优点是分离效果好、纯度高，抗体被固定化可重复使用，其缺点是柱的制备工艺复杂，抗体成本昂贵，难以工业化生产。超滤法操作简便，费用相对较低，易于形成工业化规模，其缺点是乳铁蛋白纯度较低，膜需经常清洗。

超滤法是生产食品用乳铁蛋白zui具实现工业化潜力的方法 ，具有极高的营养价值。

乳铁蛋白及其蛋白降解产物—乳铁蛋白肽具有广泛的生物学活性，包括广谱抗菌作用、消炎、抑制肿瘤细胞生长及调节机体免疫反应等，被认为是一种新型抗菌、抗癌药物和极具开发潜力的食品、化妆品添加剂，如美国食品药品管理局早巳允许乳铁蛋白作为食品添加剂用于运动、功能性食品。

乳铁蛋白正确的分离和检测的方法！

乳铁蛋白属于先天免疫系统的成分物质。除了能够结合和运输铁离子的主要功能外，乳铁蛋白还具有抗菌，抗病毒，抗寄生虫，催化，防癌抗癌，抗过敏和辐射防护的功能和属性。

母乳与配方奶粉相比，母乳喂养的婴幼儿能更有效的利用母乳中的营养物质，也不易患各种感染性疾病，保持正常生长和发育，主要是因为母乳中含有乳铁蛋白、免疫球蛋白和溶菌酶等多种活性蛋白，能促进营养成分的消化、吸收，并保护机体免受微生物感染。

其中乳铁蛋白还通过促进胃肠道，特别是黏膜免疫系统的正常发育，在机体免疫防疫系统方面起着重要作用，奶粉中添加了乳铁蛋白更接近母乳，从而强化这些免疫因子能增加其免疫功能。

原理：混有乳铁蛋白(LF) 抗原的琼脂糖倾入平板，凝冻后打一些小孔，接入LF样品。随着抗原呈放射形扩散， 在以小孔为中心的环状区域形成抗原?抗体反应沉淀带， 沉淀带在RID染色液的作用下被染色，环的直径与抗体(LF)的浓度成正比。通过标准曲线，可以测出样品中的(LF) 浓度。

操作步骤：将预涂过的玻璃板置于水平桌面上，在琼脂糖缓冲液中 加入150ml(抗血清，仔细混合后将溶液倒在玻璃板中心。表面张力可以阻止溶液溢出，必要时用试管上缘帮助溶液分散以确保溶液均匀分散到玻璃板的各边。

将凝胶在室温下固化15min，然 后置于恒湿器中在冰箱中保存1h 。将打孔器与抽真空设备连接，并利用带模板的隔板架在凝胶上 打16个小孔。

用注射器小心地将12.5ml样品注入玻璃板中，将凝胶置于恒湿器中，室温下在水平桌面上放置48h后清洗凝胶。选择正确角度，2次精确测量环的直径，以此来测定LF浓度。

结果计算：每毫升LF的浓度(×10 ) =
式中：A为LF标准溶液(mg/mL) ；
W为质量(mg) 。

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