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公司新闻
PCR法支原体检测试剂盒新品推出！
点击次数：647发布时间：2018/12/20
PCR法支原体检测试剂盒新品推出！
产品用途
《PCR法支原体检测试剂盒》可用于检测一切可能含支原体的样品，比如：（1）体外细胞培养的上清；（2）血清；（3）各种体液，如唾液、尿液、鼻腔分泌物等；（4）别的液体样品。本产品仅供研究使用。
产品简介
哺乳动物细胞的培养，支原体（Mycoplasma）污染是个世界性的问题。支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数，导致实验结果的不准确、甚至完全错误。从2013年开始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及细胞培养都要进行支原体检测。相信会有越来越多的高水平期刊将做出同样的支原体检测要求。
培养法是相对可靠的支原体检测技术，但是该方法非常耗时的，需要数周，不适合作为细胞培养液中支原体污染的快速检测。此外，通过固体培养法无法检测污染细胞的一种zui常见的支原体，即猪鼻支原体（M.Hyorhinis）。这是因为猪鼻支原体无法在支原体固体培养基上形成可见的菌落。而猪鼻支原体约占所有支原体污染的20-50%。
有的实验室使用荧光染色法检测支原体，但是该方法灵敏度太低，当检测成阳性时，细胞经常已经严重污染。
目前，细胞培养液中支原体污染的检测通常使用的是PCR法。
本公司已经开发出了专用于体外细胞培养的《一步法恒温支原体检测试剂盒》，与PCR法支原体检测相比，其具有许多优点：耗时短、灵敏度高、操作简单、不会被细胞代谢产物抑制、结果无需电泳肉眼可直接判断等。
尽管如此，《一步法恒温支原体检测试剂盒》可能也有个小缺点：因为《一步法恒温支原体检测试剂盒》需要至少同时使用4条引物才能完成扩增，其引物设计相对困难。虽然经我们测试，该试剂盒至少可认识其说明书中列举的13种支原体，而这13种支原体大约占污染细胞的支原体种类的99%左右。但是，不排除《一步法恒温支原体检测试剂盒》无法识别个别在体外细胞培养中出现概率极低的支原体。为此，我们特意开发了具有广谱识别能力的《PCR法支原体检测试剂盒》作为补充。此外，单独使用目前市面上的任何一种支原体检测试剂盒，都无法做到100%正确，既不会漏检（假阴性），也不会多检（假阳性）。严格的支原体检测，至少需要使用两种，做好使用三种不同原理的支原体检测方法同时进行检测，才能使检测结果接近100%正确。
如果您想得到100%正确的支原体检测结果，同时使用本公司生产的《一步法恒温支原体检测试剂盒》和《PCR法支原体检测试剂盒》进行检测，将会得到比较满意的结果。
检测过程:
为了准确判断细胞是否有支原体的污染，待测的细胞培养液样品zui好来源于至少培养3天且汇合度在70-90%左右的细胞培养液上清（贴壁细胞）。悬浮培养的细胞也需要在换液传代后，至少让细胞生长3天再取培养液进行检测。取150 μL上述待测样品，在普通台式离心机上1200 rpm (大约150-200 g)离心5 min，取离心后的上清100 μL用于支原体检测，丢弃下层剩余的50 μL（含细胞沉淀）。收集并已经离心去除细胞的待测样品如果不立即检测，请放于-20℃或-80℃冰箱保存，不得放于室温或4℃冰箱。样品在-20℃至少可以保存一个月，在-80℃基本可以长期保存。
注意：本步骤的低速离心是为了去除哺乳动物细胞，以排除其不必要的干扰。所以离心力要严格控制在150-200 g，该离心力下，哺乳动物细胞将被沉淀下来而支原体不会。如果错误使用更高的离心力将可能导致支原体也被离心下来，从而导致假阴性。PCR法支原体检测试剂盒新品推出！
注意事项
如果586 bp条带和270 bp左右的条带都没有出现（如图1，泳道6），在排除PCR试剂的问题后（即阴性对照可以正常扩增），说明该样品含有抑制PCR扩增的代谢产物。有关PCR的扩增会被细胞的代谢产物抑制的问题，Sigma公司的LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit（货号MP0035）的PCR法支原体检测试剂盒说明书中也特别提到了这点，说明这是一个PCR法支原体检测中经常遇到的问题，其强烈建议用试剂盒进行DNA提取后再进行鉴定。这也是PCR法支原体检测的致命弱点。为了克服该问题，以下问题必须注意：（1）您购买的PCR法支原体检测试剂盒，其扩增产物中必须含有内参（Internal Contol）条带作为对照【本试剂盒的586 bp条带就是内参条带】。否则，如果没有内参作为对照，即使样品扩增后没有支原体特异条带，你也无法确定是因为样品确实没有支原体还是因为PCR被细胞的代谢产物抑制导致的假阴性。（2）如果出现PCR的扩增被细胞的代谢产物抑制时，请使用血液基因组DNA抽提试剂盒，抽提支原体DNA后再进行PCR鉴定。（3）同时使用本公司生产的《一步法恒温支原体检测试剂盒》进行检测，经严格测试，该试剂盒的扩增不会被细胞的代谢产物抑制。
本试剂盒与Sigma公司的LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit（货号MP0035）的设计原理一样，可以替代后者用于各类支原体的检测。
根据支原体DNA的序列，本试剂盒可以识别所有100多种至今已发现的支原体，具有广谱的识别能力。
如发现细胞被支原体污染，本公司提供细胞专用支原体清除和预防试剂。
PCR法支原体检测试剂盒新品推出！
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