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线粒体呼吸链复合体Ⅰ检测试剂盒大促！
点击次数：509发布时间：2019/10/30
线粒体呼吸链复合体Ⅰ检测试剂盒大促！
产品说明：
复合体Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又称 NADH-CoQ 还原酶或 NADH 脱氢酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中的蛋白复合物。该酶催化一对电子从 NADH 传递给 CoQ，同时可使 O2还原生成 O2-，是呼吸电子传递链上产生 O2.-的主要部位。测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC）状态，而且可以反映活性氧（ROS）生成状态。复合体Ⅰ能够催化 NADH 脱氢生成 NAD+，在 340nm 下测定 NADH 的氧化速率计算出该酶活性的大小。
操作步骤：
一、复合体的提取：
(1) 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1.0 mL 提取液，用匀浆器或研钵于冰上匀浆。
(2) 4 ℃ 600 g 离心 10min。
(3) 将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g 离心 15min。
(4) 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。
(5) 在沉淀中加入 400µL 提取液，超声波破碎（功率 20％，超声 5 秒，间隔 10 秒，重复 15 次），用于复合体Ⅰ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。
注意事项：
1. 为保证实验结果的准确性，需先取 1-2 个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于 1.5），可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若∆A 大于 0.4，需将样本稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数）；若∆A 偏小，则可以通过增加加入的样品体积来提高灵敏度。
2. 样品蛋白浓度需自行测定，推荐我公司 BCA 蛋白浓度测定试剂盒。由于提取液中含有较高浓度的蛋白，所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
3. 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活，若用样本鲜重计算，则需加测胞浆提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方为总酶活。
4. 本试剂盒试剂足够完成 100 管反应。
5. 附:使用样本重量计算公式：（样本检测数为 100T/48S）
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